IBDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立和胶体金试纸条的研制

发布时间：2024-04-02 03:48

　　传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的以侵害雏鸡淋巴组织，特别是中枢免疫器官—法氏囊为主要特征的传染病。该病不仅引起患病动物死亡，而且还导致机体免疫抑制，是引起我国及世界养禽业经济损失严重的主要传染病之一。近几年，由于变异株和超强毒株（vvIBDV）的出现，使本病的发生和流行出现新的特点，对养鸡业的危害更加严重，并给临床诊断和治疗带来了一定困难。因此，研制快速、准确的诊断方法对IBD的防治至关重要。本研究旨在制备抗IBDV的单克隆抗体，建立IBDV双抗体夹心ELISA和胶体金免疫层析试纸条检测方法，为IBD的快速检测和诊断提供帮助。 1.分泌抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 用纯化的IBDV抗原免疫BALB/c小鼠，制备脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞系融合，获得3株能稳定分泌抗IBDV VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为1D11、2G8和2E5，抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ，诱生腹水的抗体效价分别为107、106和107。间接免疫荧光试验（IFA）表明，3株单克隆抗体均与感染IBDV的DF-1细胞发生特异性反应；免疫印迹...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1IBDV基因组结构示意图

(5’-noncodingregion,5’-NCR)、编码区和3’端非编码区(3’-noncodingregion3’-NCR)(Kibengeetal，1997；Mundtetal，1995)。A节段长约3200~3300....

图2胶体金免疫层析试纸条结构示意图

体硝酸纤维素膜的制备pH7.6的PBS分别将纯化的2G8单抗和羊抗鼠IgG稀释为以下/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL，喷涂于硝间距为0.5cm且互相平行的检测线和对照线，置室温自然干燥F-1细胞培养物作为抗原进行层析....

图3纯化病毒的电镜检查结果(Bar=100nm)

纯化病毒的电镜检查结果(Bar=10usobservationunderelectronmicros检测方法，纯化IBDV抗原的最融合率为90%(259/288)。经间接BDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株清液与腹水抗体效价测定结果见表1单克隆抗体的亚类及效价测定

图4单克隆抗体在DF-1细胞上的间接免疫荧光鉴定图(100×)

29图4单克隆抗体在DF-1细胞上的间接免疫荧光鉴定图(100×)DVB87的DF-1细胞分别与1D11,2G8,2E5反应；b,d,f:正常DF1D11,2G8,2E5反应Fig.4Indirectinimmunofluorescenceassa....

本文编号：3945767