金黄色葡萄球菌重组酶聚合酶扩增方法的建立

发布时间：2024-04-02 03:06

　　为建立基于重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术的金黄色葡萄球菌快速检测方法,本研究根据该菌耐热核酸酶nuc基因的保守序列,设计特异性RPA扩增引物,并经反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。结果显示:建立的金黄色葡萄球菌快速检测方法可在37℃孵育35 min特异性检测金黄色葡萄球菌,而对其它病原的检测结果为阴性,特异性较强;对该菌的纯培养物和人工污染该菌的牛奶样品中的最低检出限均为10 cfu,敏感性高。利用该方法和国标培养法同时检测市场购买的牛奶样品和猪肉样品,结果显示二者检测结果一致。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速、特异性强、灵敏度高且不依赖于昂贵的仪器设备,适用于基层实验室检测。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株与检测样品
    1.2 主要试剂
    1.3 引物的设计与合成
    1.4 细菌培养和基因组DNA提取
    1.5 RPA反应体系和反应条件的优化
    1.6 RPA的特异性试验
    1.7 RPA检测金黄色葡萄球菌的灵敏度试验
    1.8 RPA检测金黄色葡萄球菌人工污染牛奶样品的灵敏度试验
    1.9 牛奶和肉制品的检测
2 结果
    2.1 金黄色葡萄球菌nuc基因RPA扩增结果
    2.2 RPA反应温度与反应时间的优化结果
    2.3 RPA的特异性试验结果
    2.4 RPA检测金黄色葡萄球菌的灵敏度试验结果
    2.5 RPA检测金黄色葡萄球菌人工污染牛奶样品的灵敏度试验结果
    2.6 牛奶和肉制品的检测结果
3 讨论



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