獭兔MITF不同可变剪接体对黑色素沉积的影响

发布时间：2024-04-11 22:13

　　小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor, MITF)在哺乳动物皮毛的黑色素形成中发挥了重要作用,而兔 MITF基因功能及其不同可变剪接体对黑色素沉积的影响还未见报道。基于此,根据NCBI预测结合文献报道,设计 MITF编码区特异性引物,采用RT-PCR结合TA克隆测序的方法,鉴定兔 MITF基因的6种可变剪接体: MITF X1、 MITF X2、 MITF X3、 MITF X4、 MITF X5和MITF X6。通过进化树分析,发现6个可变剪切体归为一个分支,与人和猩猩的进化距离最近。进一步构建 MITF不同剪接体的过表达载体,转染到家兔黑色素细胞中,发现MITF蛋白亚细胞定位于细胞核中;通过荧光定量检测发现 MITF X1～X4过表达显著增加GPNMB的mRNA表达量(P<0.05), MITF X1～X3过表达显著增加TYR的mRNA的表达量(P<0.05), MITF X2过表达显著增加 PMEL-17的mRNA表达量(P<0.05),其余 MITF剪接体的过表达对下游基因表达量的影...

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【部分图文】：

图1MITF各可变剪接体的基因结构图

根据NCBI预测的MITF可变剪接体序列设计引物,经扩增共发现MITF基因的6种可变剪接体,分别命名为MITFX1、MITFX2、MITFX3、MITFX4、MITFX5和MITFX6。由图1可以看出,6种MITF剪....

图2不同物种MITF基因序列系统进化树

将兔MITF基因与人、猪、羊、猩猩、羊驼、马、犬、猫和鸡的MITF基因序列输入到MEGA6.0软件中,进行系统进化树分析。由图2可知,构建的进化树大体分成两支,家禽鸡作为独立一支,剩余的10个物种构成另一个独立分支,家兔MITFX1～X6剪接体在其中的一个分支上,....

图3pEGFP-N1-MITF转染黑色素细胞（100×）

收集转染后的黑色素细胞,碱裂解处理细胞,使用酶标仪测定黑色素细胞中总黑色素、真黑色素和褐黑色素的含量。黑色素含量测定发现,MITFX1～X6剪接体显著增加黑色素细胞中总黑色素和真黑色素含量(P<0.05),均可影响黑色素细胞黑色素沉积(图6)。图4pEGFP-N1-MI....

图5MITF过表达对相关基因表达的影响

哺乳动物毛色与黑色素密切相关,黑色素的产生和成熟是一个复杂的调控过程,受许多基因的影响,其中MITF基因对黑素细胞作用和黑素合成具有重要调控作用[15-16]。目前,在人、小鼠、绵羊、羊驼、大鼠、仓鼠、鸡、鹌鹑和斑马鱼等动物已成功克隆出MITF基因,这些序列同源性较高,特....

本文编号：3951220