棉酚对新疆多浪羊淋巴细胞IL-8基因和蛋白的表达影响
发布时间：2024-04-11 22:31
新疆不仅是畜牧业大省,同时也是棉花种植大省。产量丰富的棉籽饼粕,蛋白质含量高,价格低廉,大量应用棉籽饼粕作为饲料来源,是解决新疆南疆绵羊饲料短缺的有效方法之一。然而,棉籽饼粕中含有棉酚,棉酚是一种细胞毒、血管毒、神经毒,可对绵羊机体造成损伤,从而制约了棉籽饼粕在养殖业中的应用。IL-8是一种能激活嗜中性粒细胞的趋化性细胞因子,对炎症和免疫反应具有重要的调节作用。为了了解棉酚对多浪羊损伤的过程中,IL-8对机体的免疫调节作用,本实验采取实时荧光定量PCR法测定不同浓度、不同时间的棉酚作用于多浪羊淋巴细胞后IL-8基因的表达量变化,以便用于更好地指导生产实践。以新疆多浪羊为研究对象,分离多浪羊的外周血淋巴细胞,以不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L、25μmol/L、30μmol/L、35μmol/L)的棉酚进行刺激,刺激时间1h、2h、3h、4h、8h,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR检测IL-8基因的表达。结果表明,随着棉酚浓度的增加和作用时间的延长,IL-8的表达量先呈现出递增后迅速下降,棉酚作用浓度10μmol/L,作用时间2h时IL-...
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
前言
第1章 文献综述
1.1 棉酚的研究进展
1.1.1 棉酚的结构性质
1.1.2 棉酚的生物学作用
1.1.3 棉酚的毒理学作用
1.2 IL-8的研究进展
1.2.1 IL-8的产生
1.2.2 IL-8的基因定位及结构
1.2.3 IL-8的受体结构
1.2.4 IL-8的生物学功能
1.3 基因差异表达方法
第2章 棉酚对多浪羊淋巴细胞IL-8基因表达的影响
2.1 材料
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验试剂
2.1.3 试验仪器
2.2 方法
2.2.1 多浪羊淋巴细胞的分离
2.2.2 不同浓度棉酚作用于多浪羊淋巴细胞
2.2.3 总RNA的提取
2.2.4 cDNA的合成
2.2.5 引物设计
2.2.6 标准曲线的生成
2.2.7 采用2(－△△CT)法分析棉酚对IL-8基因的表达量
2.3 结果与分析
2.3.1 IL-8基因标准曲线结果
2.3.2 GAPDH基因标准曲线结果
2.3.3 2
(－△△(CT))法分析棉酚对IL-8基因的表达量结果
2.3.4 不同时间棉酚作用对IL-8基因表达量的影响
2.3.5 不同浓度棉酚作用对IL-8基因表达量的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第3章 新疆多浪羊pcDNA3.1-GFP-IL-8真核表达载体的构建与鉴定
3.1 材料
3.1.1 载体、宿主菌及样本
3.1.2 试验试剂
3.1.3 试验仪器
3.1.4 引物设计
3.2 方法
3.2.1 多浪羊淋巴细胞的分离
3.2.2 总RNA提取、cDNA合成
3.2.3 IL-8的PCR扩增与纯化
3.2.4 pMD-18T-IL-8重组质粒的转化
3.2.5 重组质粒pMD-18T-IL-8的鉴定
3.2.6 pcDNA3.1-GFP与IL-8的连接
3.2.7 pcDNA3.1-GFP-IL-8转化DH5α
3.2.8 PCR法鉴定pcDNA3.1-GFP-IL-8中IL-8片段
3.2.9 酶切质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8鉴定IL-8基因
3.3 结果与分析
3.3.1 总RNA电泳鉴定结果
3.3.2 IL-8的PCR电泳鉴定结果
3.3.3 重组质粒pMD-18T-IL-8的菌落PCR鉴定结果
3.3.4 重组质粒pMD-18T-IL-8的酶切鉴定结果
3.3.5 真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8PCR鉴定结果
3.3.6 真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8酶切鉴定结果
3.3.7 真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8酶切产物DNA序列测定结果
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 棉酚对多浪羊淋巴细胞IL-8的表达影响研究
4.1 材料
4.1.1 试验试剂
4.1.2 试验仪器
4.1.3 试验溶液的配制
4.2 方法
4.2.1 脂质体法转染pcDNA3.1-GFP、pcDNA3.1-GFP-IL-8至淋巴细胞
4.2.2 实时荧光定量PCR检测六种处理IL-8的基因表达
4.2.3 Westernblotting检测六种处理IL-8的蛋白表达
4.3 结果与分析
4.3.1 脂质体法转染pcDNA3.1-GFP、pcDNA3.1-GFP-IL-8至淋巴细胞的镜检图与分析
4.3.2 实时荧光定量PCR检测六种处理IL-8的基因表达结果分析
4.3.3 Westernblotting检测六种处理IL-8的蛋白电泳结果
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3951241
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
前言
第1章 文献综述
1.1 棉酚的研究进展
1.1.1 棉酚的结构性质
1.1.2 棉酚的生物学作用
1.1.3 棉酚的毒理学作用
1.2 IL-8的研究进展
1.2.1 IL-8的产生
1.2.2 IL-8的基因定位及结构
1.2.3 IL-8的受体结构
1.2.4 IL-8的生物学功能
1.3 基因差异表达方法
第2章 棉酚对多浪羊淋巴细胞IL-8基因表达的影响
2.1 材料
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验试剂
2.1.3 试验仪器
2.2 方法
2.2.1 多浪羊淋巴细胞的分离
2.2.2 不同浓度棉酚作用于多浪羊淋巴细胞
2.2.3 总RNA的提取
2.2.4 cDNA的合成
2.2.5 引物设计
2.2.6 标准曲线的生成
2.2.7 采用2(－△△CT)法分析棉酚对IL-8基因的表达量
2.3 结果与分析
2.3.1 IL-8基因标准曲线结果
2.3.2 GAPDH基因标准曲线结果
2.3.3 2
(－△△(CT))法分析棉酚对IL-8基因的表达量结果
2.3.4 不同时间棉酚作用对IL-8基因表达量的影响
2.3.5 不同浓度棉酚作用对IL-8基因表达量的影响
2.4 讨论
2.5 小结
第3章 新疆多浪羊pcDNA3.1-GFP-IL-8真核表达载体的构建与鉴定
3.1 材料
3.1.1 载体、宿主菌及样本
3.1.2 试验试剂
3.1.3 试验仪器
3.1.4 引物设计
3.2 方法
3.2.1 多浪羊淋巴细胞的分离
3.2.2 总RNA提取、cDNA合成
3.2.3 IL-8的PCR扩增与纯化
3.2.4 pMD-18T-IL-8重组质粒的转化
3.2.5 重组质粒pMD-18T-IL-8的鉴定
3.2.6 pcDNA3.1-GFP与IL-8的连接
3.2.7 pcDNA3.1-GFP-IL-8转化DH5α
3.2.8 PCR法鉴定pcDNA3.1-GFP-IL-8中IL-8片段
3.2.9 酶切质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8鉴定IL-8基因
3.3 结果与分析
3.3.1 总RNA电泳鉴定结果
3.3.2 IL-8的PCR电泳鉴定结果
3.3.3 重组质粒pMD-18T-IL-8的菌落PCR鉴定结果
3.3.4 重组质粒pMD-18T-IL-8的酶切鉴定结果
3.3.5 真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8PCR鉴定结果
3.3.6 真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8酶切鉴定结果
3.3.7 真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-IL-8酶切产物DNA序列测定结果
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 棉酚对多浪羊淋巴细胞IL-8的表达影响研究
4.1 材料
4.1.1 试验试剂
4.1.2 试验仪器
4.1.3 试验溶液的配制
4.2 方法
4.2.1 脂质体法转染pcDNA3.1-GFP、pcDNA3.1-GFP-IL-8至淋巴细胞
4.2.2 实时荧光定量PCR检测六种处理IL-8的基因表达
4.2.3 Westernblotting检测六种处理IL-8的蛋白表达
4.3 结果与分析
4.3.1 脂质体法转染pcDNA3.1-GFP、pcDNA3.1-GFP-IL-8至淋巴细胞的镜检图与分析
4.3.2 实时荧光定量PCR检测六种处理IL-8的基因表达结果分析
4.3.3 Westernblotting检测六种处理IL-8的蛋白电泳结果
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3951241
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