CRISPR/Cas9介导RB1基因敲除及其在鸡前脂肪细胞分化、增殖中的功能研究

发布时间：2024-04-11 23:15

　　旨在研究RB1基因在鸡前脂肪细胞分化和增殖过程中的功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统在鸡前脂肪细胞中敲除RB1基因,检测鸡前脂肪细胞的分化和增殖能力及相关标志基因的表达水平。结果表明,CRISPR/Cas9系统能够有效介导RB1基因的敲除并引起RB1基因翻译的提前终止,敲除效率可以达到10%。油红O提取比色和CCK-8的结果显示,敲除RB1基因后,鸡前脂肪细胞的分化能力减弱、增殖能力增强;qRT-PCR结果显示,RB1基因敲除之后脂肪细胞分化标志基因G0S2、FAS、A-FABP的mRNA表达水平下降,尤其是G0S2基因的表达水平在前脂肪细胞分化的各个阶段都表现为显著的下降。同时RB1基因敲除还引起细胞周期相关基因CyclinD1、E2F1、Ki67、PCNA的mRNA表达水平升高。初步推断,RB1基因可能是调控鸡前脂肪细胞分化和增殖的关键调节因子。

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 gRNA的设计和载体构建
        1.2.2 gRNA的体外转录及体外切割活性检测
        1.2.3细胞转染
        1.2.4 CRISPR/Cas9介导的细胞打靶效率和突变模式检测
        1.2.5 前脂肪细胞诱导分化和油红O染色及提取比色
        1.2.6 CCK-8法检测细胞增殖
        1.2.7 基因表达检测
2 结果
    2.1 鸡RB1基因打靶载体的构建以及gRNA打靶效率的体外酶切检测
    2.2 CRISPR/Cas9介导的鸡前脂肪细胞中RB1基因的敲除
    2.3 RB1基因促进鸡前脂肪细胞的分化
    2.4 RB1基因抑制鸡前脂肪细胞的增殖
3 讨论



本文编号：3951293