猪圆环病毒2型和猪细小病毒体外混合感染致病机制的研究

发布时间：2024-04-11 23:27

　　猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus associated disease, PCVAD)的主要病原,是重要的免疫抑制性疾病,给世界养猪业带来了严重的经济损失。猪圆环病毒2型单独感染并不能引起典型的临床症状,当与其它病原体混合感染时能促进疾病的发生。猪圆环病毒2型与猪细小病毒有共同的靶细胞,其混合感染的发病机制仍不清楚,鉴于猪圆环病毒2型与猪细小病毒混合感染是模拟断奶仔猪多系统衰竭综合症(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)的典型发病模型。本研究拟通过检测猪圆环病毒2型与猪细小病毒体外混合感染不同细胞细胞因子水平变化,对其混合感染的机制进行初步探讨。1. PCV2, PPV, IFN-γ,TNF-α, IL-10, β-actin real-time PCR检测方法的建立本研究根据GenBank中PCV2, PPV,猪IFN-y,猪TNF-a,猪IL-10, β-actin基因序列设计引物,用RT-PCR扩增猪肺泡巨噬细...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第一部分 文献综述
    第一章 猪圆环病毒2型的国内外研究进展
        1 猪圆环病毒2型概述
            1.1 病原学
            1.2 猪圆环病毒的基因结构及编码蛋白
            1.3 病毒编码的蛋白
            1.4 流行病学
        2 病毒与宿主免疫系统的相互作用
            2.1 免疫细胞的感染
            2.2 IL-10等细胞因子在PCV2发病机制中的作用
            2.3 病毒和宿主蛋白之间的作用
            2.4 病毒DNA和宿主蛋白之间的相互作用
        3 猪圆环病毒2型的致病机制
            3.1 淋巴细胞缺失和免疫抑制
            3.2 PCV2感染和细胞凋亡
            3.3 PCV2病毒毒力
            3.4 遗传易感性
            3.5 PCVAD相关的免疫增强作用
        4 保护性免疫
            4.1 疫苗与免疫
            4.2 中和抗体和细胞免疫在保护中的作用
        5 PCVAD的防治
        6 总结和未来展望
        参考文献
    第二章 猪细小病毒及与猪圆环病毒混合感染的研究进展
        1 病原学
        2 流行病学及致病机制
            2.1 流行病学
            2.2 致病机理
        3 PCV2与PPV混合感染的研究进展
        参考文献
第二部分 实验研究
    第三章 PCV-2,PPV IFN-γ,TNF-α,IL-10和β-actin部分基因片段real-time PCR检测方法的建立
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株、细胞株和菌株
            1.2 载体
            1.3 主要试剂
            1.4 主要仪器
        2 方法
            2.1 PCV2病毒的增殖及TCID₅₀的测定
            2.2 PPV病毒的增殖及TCID₅₀的测定
            2.3 基因组的提取
            2.4 引物的设计与合成
            2.5 目的基因的扩增
            2.6 PCV2、PPV及细胞因子重组克隆质粒的构建
            2.7 real-time PCR方法的建立
            2.8 real-time PCR反应条件的优化
            2.9 real-time PCR方法学评价
        3 结果
            3.1 PCV2、PPV及猪细胞因子目的基因的扩增
            3.2 重组质粒的双酶切鉴定
            3.3 重组质粒浓度的计算
            3.4 反应条件的优化
            3.5 real-time PCR方法学评价
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 PCV2与PPV混合感染对原代PAM的影响
        摘要
        1 材料
            1.1 病毒与细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 实验动物
        2 方法
            2.1 肺泡巨噬细胞(PAM)的分离
            2.2 PCV2和PPV混合感染肺泡巨噬细胞实验设计
            2.3 PCV2和PPV在肺泡巨噬细胞中病毒核酸拷贝数的检测
            2.4 PCV2和PPV混合感染PAM后PCV2 IFA检测
            2.5 细胞因子IFN-γ,TNF-α,IL-10和β-actin mRNA的real-time PCR检测
            2.6 数据分析
        3 结果与分析
            3.1 病毒感染PAM后病毒核酸拷贝数的变化
            3.2 病毒感染PAM后PCV2 IFA检测
            3.3 病毒感染PAM后细胞因子表达水平的变化
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第五章 PCV2与PPV混合感染对3D4/21细胞的影响
        摘要
        1 材料
            1.1 病毒与细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 PCV2和PPV混合感染3D4/21细胞实验设计
            2.2 PCV2和PPV在3D4/21细胞中病毒核酸拷贝数的检测
            2.3 PCV2和PPV混合感染PAM后PCV2IFA检测
            2.4 细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-10和β-actin mRNA的real-time PCR检测
            2.5 数据分析
        3 结果与分析
            3.1 病毒感染3D4/21细胞后病毒核酸拷贝数的动态变化
            3.2 病毒感染3D4/21后PCV2 IFA检测
            3.3 病毒感染3D4/21后细胞因子表达水平的变化
        4 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢



本文编号：3951308