蓝舌病病毒16型VP2、VP5蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

发布时间：2024-04-15 01:56

　　蓝舌病(Bluetongue, BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起，由库蠓等昆虫传播的反刍动物非接触性传染病；主要侵害绵羊、山羊。BTV中存在大量的基因变异和抗原变异，导致其有26个不同的血清型，并且同一血清型内含有大量的变异毒株。由于不同血清型间缺乏有效的交叉免疫保护，这为有效的多价疫苗的研究带来困难。血清型特异性诊断方法的研究对控制BT有重要意义。 BTV VP2蛋白是决定病毒血清型特异性的主要结构蛋白，在本研究中，我们通过杆状病毒表达系统表达真核重组BTV16VP2蛋白，并以此为免疫原免疫BALB/c小鼠制备了两株针对BTV16型VP2蛋白血清型特异性单克隆抗体(MAbs)。为鉴定两株型特异性MAbs所识别的抗原表位，我们设计了87对引物(每对引物编码16个氨基酸，87对引物覆盖BTV16型VP2蛋白全长，相邻两对引物含有5个氨基酸重叠区，以最大限度保持VP2蛋白上的线性表位)，通过原核表达方法表达出87条麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽，以此作为包被抗原通过间接ELISA方法筛选两株MAbs所识别的表位区域，并利用肽扫描技...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 蓝舌病概述
        1.1.1 BTV 的分类地位与病原学特性
        1.1.2 当前全球范围内 BTV 分布趋势
        1.1.3 BT 临床症状及病理变化
        1.1.4 BT 预防
        1.1.5 BTV 生命周期
        1.1.6 BTV 编码蛋白质及生物学功能
    1.2 BTV VP2、VP5 抗原表位研究进展
    1.3 本研究的目的与意义
第二章 BTV16 VP2 蛋白血清型特异性单克隆抗体制备及抗原表位鉴定
    2.1 实验材料与方法
        2.1.1 细胞、质粒、病毒和实验动物
        2.1.2 真核重组 BTV16 VP2 蛋白表达、纯化及生物学活性鉴定
        2.1.3 BTV16 VP2 蛋白血清型特异性单克隆制备及特性鉴定
        2.1.4 BTV16 VP2 蛋白截短表达
        2.1.5 BTV16 VP2 蛋白血清型特异性抗原表位鉴定
        2.1.6 BTV16 VP2 蛋白血清型特异性 B 细胞表位保守性分析
        2.1.7 MAbs 与 BTV16 型病毒不同地区分离株相应表位区域的反应性
    2.2 结果
        2.2.1 BTV16 VP2 基因 PCR 扩增
        2.2.2 真核重组 BTV16 VP2 蛋白表达与纯化鉴定
        2.2.3 真核重组 BTV16 VP2 蛋白生物学活性鉴定
        2.2.4 BTV16 VP2 蛋白 MAbs 生物学活性鉴定
        2.2.5 87 条 MBP 融合短肽的原核表达
        2.2.6 BTV16 VP2 蛋白 MAbs 抗原表位初步鉴定
        2.2.7 BTV16 VP2 蛋白 MAbs 抗原表位精确鉴定
        2.2.8 抗原表位保守型和特异性分析
    2.3 讨论
第三章 BTV16 VP5 蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定
    3.1 实验材料与方法
        3.1.1 细胞、质粒、病毒和实验动物
        3.1.2 BTV16 VP5 蛋白原核表达、纯化及鉴定
        3.1.3 BTV16 VP5 蛋白真核表达、纯化及鉴定
        3.1.4 MBP-BTV16 VP5d41aa 和 His6-BTV16 VP5d41aa 蛋白生物活性鉴定
        3.1.5 BTV16 VP5 蛋白 MAbs 制备及特性鉴定
        3.1.6 BTV16 VP5 蛋白截短表达
        3.1.7 BTV16 VP5 蛋白抗原表位鉴定
        3.1.8 BTV16 VP5 蛋白抗原表位保守性分析
    3.2 结果
        3.2.1 MBP-BTV16 VP5 和 MBP-BTV16 VP5d41aa 蛋白原核表达分析鉴定
        3.2.2 真核重组蛋白 His6-BTV16 VP5 和 His6-BTV16 VP5d41aa 表达鉴定
        3.2.3 MBP-BTV16 VP5d41aa 和 His6-BTV16 VP5d41aa 蛋白生物活性鉴定
        3.2.4 BTV16 VP5 蛋白 MAbs 制备和特性鉴定
        3.2.5 BTV16 VP5 蛋白截短表达
        3.2.6 BTV16 VP5 蛋白抗原表位鉴定
        3.2.7 BTV16 VP5 蛋白抗原表位保守性分析
    3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3955557