鸡Prnp基因原核表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

发布时间：2024-04-19 04:45

　　试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L^-1,16℃,220 r·min^-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-ChPrnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。

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图6重组菌诱导表达IPTG浓度优化

图5重组菌诱导表达IPTG温度优化图7重组菌诱导表达时间优化

图7重组菌诱导表达时间优化

图6重组菌诱导表达IPTG浓度优化3讨论

图1目的基因PCR扩增产物

菌液PCR扩增获得目的DNA片段(图3),证明在不同连接体系下,目的DNA片段与载体片段都可以成功连接。图2目的DNA与pET-28a质粒的酶切产物

图2目的DNA与pET-28a质粒的酶切产物

图1目的基因PCR扩增产物图3重组表达质粒的菌液PCR鉴定

本文编号：3958249