Cj0440c基因在空肠弯曲杆菌耐药性和适应性中的作用

发布时间：2024-05-10 19:54

　　空肠弯曲菌是一种重要的能引起人感染性腹泻的食源性致病菌。患者会出现急性和自限性肠炎,严重者还会出现全身性感染或者神经性疾病-格林巴利综合症。大环内酯类和氟喹诺酮类是临床上常用的抗弯曲杆菌感染的药物。而空肠弯曲菌对这两类药物的耐药问题日益严重。为了从源头上控制耐药弯曲菌的产生,我们必须了解清楚耐药菌的产生规律及其耐药性和适应性机制。本实验室前期研究发现,以标准菌NCTC11168做参照,Cj0440c在高水平红霉素耐药菌中过量表达,且根据NCBI提供的信息,获悉该基因是一种假定的广义调节子。本研究选取Cj0440c基因为研究对象,运用分子生物学技术将标准菌及红霉素诱导的耐药菌的Cj0440c基因敲除,通过基因芯片筛选出Cj0440c敲除前后的差异表达基因,运用生物信息学分析与Cj0440c相关联的基因,设计相关的表型实验以验证Cj0440c的作用,探讨Cj0440c基因在空肠弯曲杆菌耐药性和适应性中的作用。本课题的研究为生物信息库提供了有利数据,为防止弯曲菌耐药性的产生和传播提供了理论指导和支撑。 1.耐药株的获取及相应突变体的构建 为了探索未知基因Cj0440c的功能特征及其在耐药性和...

【文章页数】：121 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
縮略语表
1 前言
    1.1 研究背景
    1.2 研究进展
        1.2.1 耐药性机制
        1.2.2 适应性研究
        1.2.3 功能未知基因Cj0440c
    1.3 研究内容和目的意义
        1.3.1 研究思路
        1.3.2 研究内容
        1.3.3 研究技术路线
        1.3.4 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 菌株及实验动物
    2.2 抗菌药物及配制
    2.3 培养基与试剂
    2.4 仪器设备
    2.5 耐红霉素空肠弯曲杆菌的诱导
    2.6 载体的构建
        2.6.1 载体构建方案
        2.6.2 突变载体的构建
        2.6.3 过表达载体的构建
    2.7 Cj0440c突变体的构建及过表达
        2.7.1 自然转化
        2.7.2 电转化
        2.7.3 突变体鉴定
    2.8 差异基因筛选
        2.8.1 基因芯片样品的准备
        2.8.2 差异表达基因的检测与分析及实时荧光定量验证
    2.9 表型检测
        2.9.1 生长力的测定
        2.9.2 药物敏感性测定
        2.9.3 鞭毛形态观察
        2.9.4 鞭毛迁移力的测定
        2.9.5 鸡体内定植能力的测定
        2.9.6 配对竞争实验
3 结果与分析
    3.1 载体的确证
        3.1.1 突变载体pCJ0440c-kan的确证
        3.1.2 过表达载体pRY112-CJ0440c的确证
    3.2 突变体的确证
        3.2.1 SM的验证
        3.2.2 RM的验证
    3.3 总RNA质量检验报告
    3.4 芯片结果分析
    3.5 差异片段序列分析
    3.6 实时荧光定量PCR验证
    3.7 表型结果
        3.7.1 生长力
        3.7.2 耐药性的检测
        3.7.3 空肠弯曲杆菌鞭毛形态的观察
        3.7.4 运动性的考察
        3.7.5 在鸡体内的定植能力
        3.7.6 在鸡体内成对竞争实验
4 讨论
    4.1 敏感菌和耐药菌突变体构建的探讨
    4.2 相关差异基因分析及Cj0440c功能推测
        4.2.1 细菌表面鞭毛成分代谢
        4.2.2 糖基化
        4.2.3 过氧化氢酶
        4.2.4 一些假定蛋白的功能推测
        4.2.5 Cj0440c在敏感菌和耐药菌中的不同作用
        4.2.6 Cj0440c对细菌与适应性的影响
5 全文总结
文献综述
    参考文献
致谢
附录
答辩委员所提问题



本文编号：3968941