广西巴马小型猪内源性反转录病毒整合后传代次数对HEK293细胞中HERV-W表达和变异的影响

发布时间：2024-05-10 20:01

　　检测不同代次广西巴马小型猪内源性反转录病毒(PERV)感染HEK293细胞模型(HEK293-PERV-BM)中,HERV-W各基因mRNA和syncytin-1蛋白表达水平,以及HERV-W各基因变异情况,评价PERV的整合对HERV-W的影响。结果显示,与HEK293细胞相比,PERV整合后,不同代次HEK293-PERV-BM中HERV-W gag、pol、env和syncytin-1的mRNA相对表达量出现不同程度的改变,且改变趋势相似,即P10或P20后开始升高,至P30最高;选取相对表达量差别较大代次,检测其syncytin-1蛋白,各代次间syncytin-1蛋白表达量的改变较mRNA的差别小。此外,PERV整合后,在P1～P55中HERV-W结构基因仅发生个别位置的点突变,未见发生固定位置的点突变或基因片段的缺失、插入及重组。本试验为系统评价PERV-BM在异种器官移植中的安全性提供参考。

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【部分图文】：

图1各代次HEK293-PERV-BM细胞感染模型中HERV-Wgag(A)、HERV-Wpol(B)、HERV-Wenv(C)和syncytin-1(D)mRNA相对表达量

应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR分别检测HEK293和HEK293-PERV-BM中HERVgag、HERVpol、HERVenv、syncytin-1和humanβ-actin的mRNA表达水平。结果如图1所示,与HEK293细胞相比,PERV整合后,不同....

图2不同代次HEK293-PERV-BM细胞感染模型中syncytin-1的Westernblot检测

按照HERV-W实时荧光定量PCR结果,选取相对表达量差别较大的第1,15,25,30代HEK293-PERV-BM进行Westernblot检测,同时设HEK293和HEK293-PERV-PK为对照。结果如图2所示,试验组和对照组均出现55000的HERV-Wsyncy....

图3不同代次HEK293-PERV-BM细胞感染模型中HERV-Wgag(A)、pol(B)、env(C)序列比对

OLDMIXON等[9]在NIH小型猪中发现了A型和C型PERV重组形成PERV-A/C病毒,其为滴度和感染性更强的重组病毒,而且PERV-BM在7号染色体上的整合与HERV-W位置较近,更加剧了对PERV与HERV重组的担忧。本试验结果表明,PERV-BM整合后,HERV-W....

本文编号：3968949