牛副流感病毒3型核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

发布时间：2024-05-11 21:09

　　牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是一种非分节的单股负链RNA病毒,在世界分布广泛,是引起牛呼吸道综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)的重要病原。BPIV3感染牛症状各异,轻者出现咳嗽发热等症状,严重的会引起继发的细菌感染,导致支气管细胞坏死,出现肺炎等状况。该病的广泛存在严重制约养牛产业的进一步发展,对养牛业的经济与发展造成了严重的损失。基于目前国内对BPIV3的研究较少,还没有商品化BPIV3检测试剂盒,国外虽有检测试剂盒,但检测成本较高。因此,建立一种具有自主知识产权的BPIV3血清学检测方法至关重要。另一方面,对BPIV3感染的研究离不开机制机理的研究,而检测BPIV3机理及基因功能的研究,需要定量检测蛋白的表达,但缺乏相应抗体。据报道,BPIV3的N蛋白是病毒核衣壳的主要成分,具有良好的免疫原性,可以用来制备检测抗体。因此本项目主要从三个方面进行研究。首先,进行N蛋白原核表达载体的构建与N蛋白的表达纯化。根据文献报道与对N基因生物信息学分析,本实验克隆了编码N蛋...

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图460份牛阴性血清间接ELISA检测结果正态分布图Fig.4Detectionof60negativeserumsamplesbyindirectELISAOD450nmvalue00.240.220.20.180.160.140.120.10.08

m值的下降比较明显，均在35%以上，而5份阴性血清的OD450nm值变化不明显(表2)，表明BPIV3能够有效阻断包被抗原与阳性血清的结合，重组N蛋白具有较强的特异性。2.4.2交叉阻断反应试验结果采用其它两种常见的牛呼吸道病毒IBRV与BVDV的兔源阳性血清先与重组N蛋白包被的....

图2重组N蛋白纯化效果检测40ku35ku25kuM:ProteinMarker;1:Negativecontrol;2:UnpurifiedNP;3:PurifiedNP

2:RecombinantNP图3重组N蛋白的westernblot鉴定Fig.3RecombinantnucleocapsidproteinreactedwiththebovinepositiveserumagainstBPIV3表1间接ELISA方法反应条件的优化结果Tabl....

图5交叉反应阻断试验结果Fig.5Theresultsofcross-reactionblockingtestTestgroupsNegativPositiv

图1-1副流感病毒结构简图

山东师范大学硕士学位论文2等也可以破坏其感染性，在20%浓度下就可以导致病毒失去活性。1.1.3BPIV3基因组结构及其编码蛋白BPIV3基因组在5′端和3′端没有常见的帽子结构和polyA尾巴，但在其基因组3′端有一段55nt左右的非常保守的非编码区，称为引导序列(1eader....

本文编号：3970374