牛呼吸道合胞体病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2024-05-11 22:50

　　牛呼吸道合胞体病毒病是由牛呼吸道合胞体病毒(Bovine Respiratory Syncytial virus,BRSV)引起的牛的一种传染病。本病呈世界性流行,为了快速准确的诊断该病,本研究在参考国内外文献的基础上,选取BRSV的N基因保守序列,设计合成特异性引物和探针,建立牛呼吸道合胞体病毒荧光定量RT-PCR检测方法,并对牛鼻拭子核酸样品进行检测。试验结果显示,该方法的最佳引物浓度为400nmoL/L、探针浓度为250 nmoL/L,退火和延伸温度均为60℃。敏感性高,可以检测出的最低样品浓度为10拷贝μ/L;特异性强,能有效区分牛病毒性腹泻病毒、牛染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛支原体、巴氏杆菌A型;重复性好,组内、组间的Ct值变异系数均小于2%;建立的标准曲线线性关系良好,相关系数(R²)为1.000,扩增效率(E)为92.4%。利用建立的方法对内蒙古不同牛场采集的鼻拭子的33份核酸样品进行荧光定量RT-PCR检测。结果显示,Ct值38左右,在33份核酸样品中检出BRSV阳性5份。为了进一步验证检出的BRSV阳性核酸,对扩增出的基因片段进行了克隆...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1牛呼吸道合胞体病毒模式图

图1牛呼吸道合胞体病毒模式图Fig.1.Diagramofbovinerespiratorysyncytialvirus.因组编码的蛋白功能吸道合胞体病毒的结构蛋白白（Attachmentprotein，G蛋白）：为粘附蛋白，与病毒的基酸，有838个核苷酸....

图3普通PCR产物的重组阳性质粒PCR鉴定

图2常规PCR扩增结果Fig.2ConventionalPCRresultsM.500bpDNALadder（bp）；1.BRSV扩增产物；2.阴性对照CR产物的重组质粒鉴定鉴定结果粒小量提取试剂盒提取牛呼吸道合胞体病毒重组质粒凝胶电泳。结果显示，目的片段....

图2常规PCR扩增结果

图2常规PCR扩增结果Fig.2ConventionalPCRresultsM.500bpDNALadder（bp）；1.BRSV扩增产物；2.阴性对照常规PCR产物的重组质粒鉴定1PCR鉴定结果采用质粒小量提取试剂盒提取牛呼吸道合胞体病毒重组质粒琼脂....

图4重组质粒鉴定结果

图4重组质粒鉴定结果Fig.4IdentificationofrecombinantplasmidM1.500bpDNALadder；1为BRSV酶切；M2.5000bpDNALad结果R鉴定为阳性质粒的质粒样品送至北京华大基因科序结果在GenBa....

本文编号：3970485