山羊支原体山羊肺炎亚种M17基因的原核表达及细胞定位研究

发布时间：2024-05-12 08:16

　　为分析山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)氨基肽酶M17的特征及细胞定位。参照GenBank中Mccp M1601株的M17基因序列,优化密码子,合成原核表达载体pET30a-M17,将鉴定正确的表达载体转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导后获得融合表达蛋白;用其免疫新西兰兔,制备超免疫血清,并测定其效价和代谢抑制效果;通过Western-blot和i ELISA两种方法对M17在Mccp细胞内的分布进行了初步研究。结果显示,pET30a-M17重组蛋白在大肠杆菌中获得成功表达,大小约50 ku,与预期相符,密码子优化后的表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在;免疫后的兔血清抗体效价达1∶80 000以上,说明M17重组蛋白具有较好的免疫原性和反应活性;M17多抗血清对Mccp无代谢抑制作用,但能够与Mccp的膜蛋白、胞浆蛋白及全菌蛋白发生特异性反应,表明M17蛋白在Mccp的细胞膜和细胞质中均有分布,但细胞膜中含量略高于细胞浆。M17的成功表达以及在Mccp中的细胞定位为其生物学功能研究奠...

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【部分图文】：

图1重组表达质粒pET30a-M17的双酶切鉴定Figure1Thedoubleenzymedigestionidentificationofpla-200bp

ker；1：Mccpwholeprotein；2：Mccpcystolprotein；3：Mccpmembraneprotein.图2pET30a-M17表达的SDS-PAGE分析Figure2SDS-PAGEanalysisontheexpressionofpET30a-M17....

图3SDS-PAGE分析Mccp各种蛋白的提取结果

中国兽医科学第50卷图3SDS-PAGE分析Mccp各种蛋白的提取结果Figure3SDS-PAGEanalysisof3typesofMccpproteinsextractedM：蛋白质分子质量标准；1：Mccp全菌蛋白；2：Mccp胞浆蛋白；3：Mccp膜蛋白。M：Prote....

图2pET30a-M17表达的SDS-PAGE分析

中国兽医科学第50卷图3SDS-PAGE分析Mccp各种蛋白的提取结果Figure3SDS-PAGEanalysisof3typesofMccpproteinsextractedM：蛋白质分子质量标准；1：Mccp全菌蛋白；2：Mccp胞浆蛋白；3：Mccp膜蛋白。M：Prote....

图4M17蛋白在Mccp细胞中分布的Western-blot分析

?布多于细胞质。2.5Mccp代谢抑制试验培养48h后，第12列对照孔已经变黄，全菌多抗血清2－10孔变为黄色，M17多抗血清2－1～2－6孔颜色变黄，2－7～2－10孔未变色；继续培养至第72小时，全菌多抗血清2－1～2－6孔颜色依然是红色，2－7～2－10孔变为黄色，而M17....

本文编号：3971110