APS对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

发布时间：2017-05-26 15:13

  本文关键词：APS对小鼠卵母细胞体外成熟的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：在动物胚胎工程技术以及动物核移植技术中,卵母细胞体外培养技术是此中非常关键的步骤,提高卵母细胞体外培养的技术对于提高动物胚胎生产应用以及促进辅助生殖技术发展具有重要意见。另外,随着经济的快速发展,也带来了一系列问题,环境污染,生活工作压力增大,导致越来越多的人面对生殖障碍。卵母细胞氧化应激,活性氧的积累,卵母细胞胞质颜色加深加重,使得受精成功率大大降低。因此,提高卵母细胞的质量变得越来越重要。黄芪多糖(Atragalus polysaccharides,APS)具有悠久的应用历史,它在抗炎、抗氧化、清除自由基方面有显著地作用。但在卵母细胞体外培养过程中有怎样的效果目前还不甚明了。此外,兽医临床用药中,黄芪注射液经常作为一种免疫增强剂与抗生素类药物联合用药,黄芪药物在使用过程中对于母畜的繁殖性能有无影响,也是一个需要我们关注的问题。本研究旨在探究APS在卵母细胞体外培养过程中的影响及其机制。采集未成熟小鼠卵母细胞添加APS(control组、0.1 mg/ml组、1.0 mg/ml组、10 mg/ml组)进行体外成熟(In vitro maturation,IVM)培养,统计卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)发生率以及第一极体(first polarbody,PB1)排出率,并通过JC-1染色方式进行卵母细胞线粒体膜电位的检测;为了进一步探究APS对氧化损伤的小鼠卵母细胞体外成熟过程中的作用,本实验进一步在卵母细胞培养液中添加丙酮醛(Methylglyoxal,MG,已有实验结果显示,利用化学试剂MG可以构建卵母细胞氧化损伤模型,使得细胞内活性氧含量增加)与APS共培养,统计GVBD发生率及PB1排出率,接着检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)产生情况,综合研究APS在小鼠卵母细胞体外培养及体外成熟中的作用。试验结果显示:(1)在小鼠卵母细胞体外成熟过程中添加APS,对卵母细胞的体外成熟率,包含GVBD发生率和PB1排出率均无显著影响。(2)线粒体膜电位检测发现各APS浓度组间也没有显著差别,而实验组的线粒体膜电位相比对照组有轻微降低。(3)添加APS与MG造成氧化损伤的卵母细胞共培养结果显示,APS(10 mg/mL)+MG实验组PB1排出率显著降低,相应的卵母细胞ROS产生量显著升高,对GVBD发生率则没有显著影响。这一结果也表明,APS在临床使用过程中对于母畜的繁殖性能是安全的。本实验结果表明:小鼠卵母细胞体外培养过程中添加APS,对其体外成熟率并没有显著的影响。添加MG与APS共培养发现APS(10 mg/mL)与MG共培养后PB1排出率显著降低,相应的细胞内ROS含量明显升高。
【关键词】：小鼠卵母细胞 APS 体外培养 氧化损伤
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S814
【目录】：

• 摘要5-7
• abstract7-11
• 文献综述11-18
• 第一章 卵母细胞体外成熟11-15
• 1.1 卵子的发生11-13
• 1.2 卵母细胞体外成熟研究进展13-15
• 第二章 APS研究进展15-18
• 2.1 黄芪概述15
• 2.2 APS研究概述15-18
• 2.2.1 抗炎活性15-16
• 2.2.2 免疫调节活性16
• 2.2.3 抗肿瘤活性16-17
• 2.2.4 抗氧化活性17-18
• 试验研究18-33
• 第三章 添加APS对小鼠卵母细胞体外成熟的影响18-27
• 3.1 材料与方法18-20
• 3.1.1 仪器设备18-19
• 3.1.2 实验材料19
• 3.1.3.方法19-20
• 3.2 结果与分析20-25
• 3.2.1 DPPH自由基清除测定20-22
• 3.2.2 不同浓度APS对卵母细胞体外成熟的作用22-24
• 3.2.3 APS对卵母细胞线粒体膜电位的影响24-25
• 3.3 讨论25-26
• 3.4 结论26-27
• 第四章 APS的抗氧化性及其对氧化损伤的卵母细胞体外成熟的影响27-32
• 4.1 材料与方法27-29
• 4.1.1 仪器设备27-28
• 4.1.2 实验材料28
• 4.1.3 方法28-29
• 4.2 结果与分析29-31
• 4.2.1 MG和APS对卵母细胞体外成熟的影响29-30
• 4.2.2 MG和APS对卵母细胞ROS水平的影响30-31
• 4.3 讨论31
• 4.4 结论31-32
• 第五章 全文总结32-33
• 参考文献33-40
• 致谢40-41
• 作者简介41

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 毛寿林;;小鼠卵母细胞冷冻保存技术研究进展[J];养殖与饲料;2008年02期

2 王炜,李跃民,俞纯方;小鼠卵母细胞的电激活[J];动物医学进展;2005年06期

3 何志全;窦忠英;;不同化学激活剂对小鼠卵母细胞的激活效果[J];中国兽医科学;2006年12期

4 刘红林;陈宜峰;范必勤;汪河海;;亚胺环已酮对小鼠卵母细胞成熟和人工激活的影响[J];农业生物技术学报;1995年04期

5 崔龙波;周雪莹;王敏强;黄秀英;孙方臻;;不同年龄昆明白小鼠卵母细胞的生发泡互换[J];动物学杂志;2005年06期

6 王松波;夏国良;周波;穆欣艺;张美佳;;PDE5抑制剂Sildenafil对小鼠卵母细胞自发成熟的影响[J];中国农业大学学报;2009年04期

7 李劲松,韩之明,朱子玉,王敏康,廉莉,陈大元;几种因素对电刺激诱导小鼠卵母细胞孤雌活化的影响[J];动物学报;2002年04期

8 彭宇洪;庄广伦;周灿权;谢守珍;程冀平;;体外培养小鼠卵母细胞及其生长分化因子-9基因表达(英文)[J];动物学研究;2006年05期

9 孟庆刚,朱士恩,常影,曾申明,张忠诚;小鼠卵母细胞氯化锶激活条件[J];中国兽医学报;2002年04期

10 陈勇,夏国良,苏友强,傅国栋;小鼠卵母细胞体外自发成熟与成熟抑制的研究[J];中国农业大学学报;1999年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 卜淑敏;夏国良;谢辉蓉;郭勇;;卵丘细胞产生的一氧化氮促进小鼠卵母细胞的成熟[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

2 朱孝荣;孙海燕;孙强;李厚达;;小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的研究[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年

3 李劲松;韩之明;朱子玉;王敏康;廉莉;陈大元;;几种因素对电刺激诱导小鼠卵母细胞孤雌活化的影响[A];中国动物学会全国显微与亚显微形态科学分会第十次形态科学与显微注射技术学术研讨会论文摘要集[C];2000年

4 霍立军;范衡宇;钟志胜;陈大元;孙青原;;泛素蛋白水解酶复合体途径在小鼠卵母细胞减数分裂成熟、受精和早期胚胎卵裂中的作用[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

5 李筱霜;卫恒习;李莉;张守全;;模拟微重力对小鼠卵母细胞减数分裂的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集[C];2012年

6 陈秀芬;夏国良;谢辉蓉;陶勇;雷蕾;;促性腺激素诱导大、小鼠卵母细胞体外成熟的差异[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年

7 谢辉蓉;夏国良;陈秀芬;张美佳;付卓;王松波;;MAS参与调节体外培养的小鼠卵母细胞自发成熟[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

8 金锐;白刚;包俊华;王莹;刘芳;;冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究[A];2011首届宁夏生殖医学学术年会资料汇编[C];2011年

9 韩斌;金锐;李灵武;王燕蓉;杨芳;于华;姚立岩;;1．0M、1．5M PROH两种浓度的小鼠卵母细胞慢冻-快融存活率比较[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

10 朱子玉;文端成;韩之明;雷蕾;刘忠华;寇朝辉;王敏康;陈大元;;小鼠卵母细胞孤雌活化期间细胞骨架的作用[A];中国动物学会全国显微与亚显微形态科学（细胞及分子显微技术科学）分会第十一次学术研讨会论文摘要集[C];2002年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王旭光;RNA干涉Dot1l表达对小鼠卵母细胞减数分裂和附植前胚胎发育的影响[D];南京农业大学;2012年

2 吕鸿;不对称分裂相关分子在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用研究[D];山东大学;2010年

3 叶英辉;Leptin和GDNF对小鼠卵母细胞成熟的旁分泌调节机制[D];浙江大学;2008年

4 周萍;小鼠裸卵体外成熟系统建立及束缚应激对小鼠卵母细胞染色体倍性影响的研究[D];山东农业大学;2010年

5 张春晖;顺式高尔基体基质蛋白GM130影响小鼠卵母细胞纺缍体组装及不对称分裂的研究[D];南方医科大学;2011年

6 赵鸿梅;Cdc25B在小鼠卵母细胞成熟过程中调节机制的研究[D];中国医科大学;2007年

7 张清华;mSpindly在小鼠卵母细胞减数分裂进程中的定位与功能[D];山东师范大学;2010年

8 孟小倩;酪氨酸激酶Pyk2在大鼠和小鼠卵母细胞减数分裂过程中的定位和功能研究[D];山东师范大学;2007年

9 张阳;蛋白激酶A/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞G_2期阻滞中作用的研究[D];中国医科大学;2005年

10 王慧利;小鼠卵母细胞染色质凝集的调控及咖啡因在山羊体细胞克隆中的应用[D];山东农业大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘佰玲;p97在小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中作用的研究[D];郑州大学;2015年

2 王婧;小鼠卵母细胞减数分裂期间HDACs对组蛋白H4K12乙酰化及H3S10磷酸化的调控[D];南京农业大学;2014年

3 闫学花;APS对小鼠卵母细胞体外成熟的影响[D];西北农林科技大学;2016年

4 余博;小鼠卵母细胞中周期蛋白B1的mRNA存储与释放的初步研究[D];西北农林科技大学;2016年

5 陈秀芬;促性腺激素诱导大、小鼠卵母细胞体外成熟的差异[D];中国农业大学;2004年

6 兰国成;乙醇及6-DMAP对小鼠卵母细胞孤雌激活的研究[D];东北农业大学;2002年

7 牛蕾;小鼠卵母细胞和小鼠核移植胚胎中高尔基体的作用探索[D];第四军医大学;2005年

8 高凤兰;小剂量一氧化氮在小鼠卵母细胞成熟中的作用及分子机制的研究[D];南昌大学;2006年

9 王昭晖;牛和小鼠卵母细胞体外成熟培养[D];陕西师范大学;2010年

10 王子玉;次黄嘌呤对昆明白小鼠卵母细胞减数分裂调控作用的研究[D];山东农业大学;2004年

  本文关键词：APS对小鼠卵母细胞体外成熟的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：397224