猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定

发布时间：2024-05-17 05:04

　　乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE,简称乙脑)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的急性自然疫源性虫媒传播的人畜共患传染病。JEV可引起成年母猪和公猪的繁殖障碍以及新生仔猪脑炎等,同时还能够感染人群。JEV的感染呈猪-蚊-人链状传播,而猪是JEV最重要的宿主。监测和预防猪乙脑的发生对于人乙脑的预防和控制具有重要意义。因此,建立快速准确的诊断方法与安全有效的疫苗是预防和控制该病的前提。本研究围绕猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制和猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定两个方面展开,具体内容如下： 1.猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制 用灭活纯化的JEV SA14-14-2株包被酶标板,通过方阵滴定法确定抗原的最佳包被浓度为0.2μg/孔,被检血清最佳稀释倍数为1：40。试验的最佳反应条件为：包被液为pH值9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液,封闭液为含0.5%牛血清白蛋白、0.5%吐温20的磷酸盐缓冲液,抗原与血清结合的最佳反应时间为30min,二抗的最佳稀释倍数为1：5000,羊抗猪酶标二抗的...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
1. 文献综述
    1.1 乙脑病毒的历史回顾
    1.2 乙脑病毒的流行病学特征
    1.3 乙脑病毒的分子生物学特征
        1.3.1 乙脑病毒的形态和基因结构
        1.3.2 乙脑病毒的蛋白质
    1.4 乙脑病毒的病原学特征
        1.4.1 乙脑病毒的理化特性
        1.4.2 乙脑病毒的增殖特性
    1.5 乙脑的诊断方法
        1.5.1 临床症状与病理变化
        1.5.2 乙脑病毒抗体的检测方法
        1.5.3 乙脑病毒抗原的检测方法
    1.6 乙脑的预防和控制
2. 研究目的与意义
3. 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 主要试剂和耗材
        3.1.2 细胞、毒株、菌株以及实验动物
        3.1.3 载体质粒
    3.2 主要试剂的配置
        3.2.1 缓冲液配制
        3.2.2 培养基配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 常规实验方法
        3.3.2 猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测方法
        3.3.3 猪源乙脑病毒的分离鉴定
4. 实验结果与分析
    4.1 猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制
        4.1.1 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度
        4.1.2 临界值判定标准
        4.1.3 封闭液的选择
        4.1.4 血清稀释液的选择
        4.1.5 血清最佳反应时间
        4.1.6 酶标二抗最佳反应时间
        4.1.7 底物最佳反应时间
        4.1.8 羊抗猪IgG-HRP酶标抗体最佳稀释浓度
        4.1.9 特异性试验
        4.1.10 敏感性试验
        4.1.11 重复试验
        4.1.12 保存期试验
        4.1.13 符合率试验
    4.2 猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定
        4.2.1 猪源病料的RT-PCR检测结果
        4.2.2 细胞的病变观察以及病毒的分离
        4.2.3 间接免疫荧光鉴定结果
        4.2.4 E基因进化树分析
        4.2.5 全基因组进化树分析
        4.2.6 GX1209株的扩增及滴度
        4.2.7 GX1209株与其他乙脑病毒株核苷酸同源性的比对结果
5. 讨论
    5.1 猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制
        5.1.1 试剂盒的判定标准
        5.1.2 试剂盒的敏感性检测
        5.1.3 试剂盒的保存期
        5.1.4 试剂盒的符合率
    5.2 猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定
6. 结论
    6.1 猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制
    6.2 猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定
参考文献
致谢



本文编号：3975423