奶牛乳房炎四种病原菌多重PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2024-05-17 14:46

　　奶牛乳房炎(Bovine mastitis,BM)是一种由病原微生物侵袭所造成的复杂的奶牛乳腺综合征疾病,其中亚临床型乳房炎尤为高发。亚临床型乳房炎在感染过程中无临床症状表现,因此给疾病的诊断和治疗带来了极大的困难。该病不仅造成了产奶量的巨大损失、养殖业经济效益的降低,同时也对动物和人类的健康造成了很大的影响。为了能够寻找到一种高效、敏感和特异的检测方法,提高对奶牛乳房炎发病情况及致病微生物的诊断率,本研究参照GenBank发表的序列,在大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌各自保守的16-23s rRNA区域及白色念珠菌的18s rRNA区域设计了4对特异性引物,建立了大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和白色念珠菌等4种乳房炎主要致病菌多重PCR检测方法,同时本实验采集40份临床奶样,对病原菌进行了分离、培养及多重PCR检测验证了检测方法的可行性,取得结果如下:(1)对甘肃省兰州市2家奶牛场采集的40份奶样进行了细菌学检测。共检出4份含有金黄色葡萄球菌的奶样,7份含有无乳链球菌的奶样,3份含有白色念珠菌的奶样,5份含有大肠杆菌的奶样;检出率为金黄色葡萄球菌10%、大肠杆菌12.5%、...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3多重PCR敏感性Figure3Sensitivityofthemultiplex-PCRM：DL2000DNAMarker；1∶1×107CFU/mL；2∶1×106CFU/mL；3∶1×105CFU/mL；4∶1×104CFU/mL；5∶1×103CFU/mL；6∶1×102

第1期丁天翊等：快速检测奶牛乳房炎四种病原菌的多重PCR方法的建立及应用2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp1319bp730bp663bp406bpM1234567M图3多重PCR敏感性Figure3Sensitivityofthemultiplex....

图2单重PCR敏感性Figure2SensitivityofPCRA：大肠杆菌单重PCR敏感性；B：白色念珠菌单重PCR敏感性；C：金黄色葡萄球菌单重PCR敏感性D：无乳链球菌单重PCR敏感性

第1期丁天翊等：快速检测奶牛乳房炎四种病原菌的多重PCR方法的建立及应用2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp1319bp730bp663bp406bpM1234567M图3多重PCR敏感性Figure3Sensitivityofthemultiplex....

图2.1单重PCR敏感性A:白色念珠菌单重PCR敏感性；B：大肠杆菌单重PCR敏感性；C：金黄色葡萄球菌单重PCR敏感性D：无乳链球菌单重PCR敏感性;M:DL2000DNA765432

CD图2.1单重PCR敏感性A:白色念珠菌单重PCR敏感性；B：大肠杆菌单重PCR敏感性；C：金黄色葡萄球菌单重PCR敏感性D：无乳链球菌单重PCR敏感性;M:DL2000DNAmarker;1:107CFU/mL;2:106CFU/mL;3:105....

图2.2多重PCR特异性检测M:DL2000marker；1：阴性对照；2：大肠杆菌；3：白色念珠菌；4：金黄色葡萄球菌；5：

图2.2多重PCR特异性检测M:DL2000marker；1：阴性对照；2：大肠杆菌；3：白色念珠菌；4：金黄色葡萄球菌；5：无乳链球菌；6：金黄色葡萄球菌+大肠杆菌+白色念珠菌；7：金黄色葡萄球菌+白色念珠菌+无乳链球菌；8：金黄色葡萄球菌+大肠杆菌+无乳链球菌；9：....

本文编号：3975744