伪狂犬病病毒变异株US3基因失活株的构建与生物学特性分析

发布时间：2024-05-19 18:05

　　为探究US3基因失活对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)变异株毒力的影响,运用En Passant操作技术,将PRV变异株AH02LA细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)BAC^PRV-G中US3基因的起始密码子进行点突变,获得重组BAC株BAC^PRV-G-US3^mut。将BAC^PRV-G-US3^mut与带有同源臂和PRV AH02LA gE/gI基因的片段共转染猪睾丸(ST)细胞,拯救病毒的同时将gE/gI基因进行恢复,获得重组病毒PRV-US3^mut。生长动力学试验发现:PRV-US3^mut在感染ST细胞早期(6 h和12 h)无病变发生,在感染24 h之后,与亲本毒株PRV AH02LA生长动力学相似,表明US3基因可能介导病毒增殖的早期阶段。此外,研究发现了US3基因抑制PRV感染ST细胞早期组织相容性复合物Ⅰ的mRNA转录。BALB/c小鼠的致病力试...

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

图1KAN抗性基因的插入与敲除鉴定

将带有同源臂的gE/gI基因DNA片段,分别与BACPRV-G-US3mut和BACPRV-G的DNA共转染ST细胞,在拯救病毒的同时,将BAC中的mini-F基因替换为变异株AH02LA株的gE/gI基因序列。转染后1d观察到在紫外光(488nm)激发下不发出荧光的病毒蚀斑....

图2重组毒株PRV-US3mut纯化

图1KAN抗性基因的插入与敲除鉴定图3亲本恢复毒株PRVrec纯化

图3亲本恢复毒株PRVrec纯化

图2重组毒株PRV-US3mut纯化图4重组病毒PRV-US3mut与PRVrecgE/gI基因序列PCR鉴定

图4重组病毒PRV-US3mut与PRVrecgE/gI基因序列PCR鉴定

图3亲本恢复毒株PRVrec纯化2.3PRV-US3mut遗传稳定性测定

本文编号：3978262