牛巴贝斯虫病实时荧光PCR诊断方法的建立及其初步应用研究

发布时间：2024-05-22 21:44

　　牛巴贝斯虫病（Bovine babesiosis）是由巴贝斯科巴贝斯属的原虫寄生于牛类动物红细胞内所引起的蜱传血液原虫病。该病对牛群危害严重，病牛贫血、血尿、迅速消瘦，病程后期死亡率高，对畜牧生产造成重大损失。因此，建立准确、灵敏、快速的检测、诊断技术，对该病的早期诊断、流行病学研究和综合防治具有重大意义。 (Ⅰ)为建立牛巴贝斯虫(Babesia bovis)的TaqMan实时荧光PCR检测方法，本研究根据GenBank中牛巴贝斯虫的18S rRNA基因保守序列，设计引物和TaqMan探针，通过优化反应体系，建立检测牛巴贝斯虫的实时荧光PCR方法。试验结果表明：实时荧光PCR对靶基因的最低检测值为1.31×101copies/μL，比常规PCR的敏感性高1000倍；而且与牛的其他血液原虫无交叉反应；组内及组间重复性试验的变异系数均小于2%，具有良好的重复性；在23份被检样品中，实时荧光PCR和常规PCR的检出率分别为52.17%和30.43%。 (Ⅱ)根据双芽巴贝斯虫（Babesia bigemina）18S rRNA基因的保守序列，设计特异性引物和TaqMan探针，建立了检测双芽巴贝...

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【部分图文】：

图1-1红细胞内的牛巴贝斯虫Fig.1-1B.bovisinredbloodcells

rne于1893年在美国德克萨斯州的牛中也发现此病，并将病原命名为]。该病给畜牧业造成重大损失，在我国，引起牛巴贝斯虫病的主要病双芽巴贝斯虫[3]。原形态巴贝斯虫为小型虫体，其长度小于红细胞半径，多数位于红细胞边缘虫体尖端相对排列成钝角，或略呈一字形排列，一个红细胞内的虫体....

图1-2红细胞内的双芽巴贝斯虫Fig.1-2B.bigeminainredbloodcells

贝斯虫病实时荧光PCR诊断方法的建立和及其初步应用研究双芽巴贝斯虫为大型虫体，其长度大于红细胞半径，多数位于红细胞中央，内的虫体常为1-2个，偶见3个。虫体呈梨籽形、圆形、椭圆形及不规则形为成双梨籽形，尖端以锐角相联。每虫体内有一团染色质块。虫体经姬姆萨染呈淡蓝色，染....

图1-3巴贝斯虫生活史Fig.1-3LifecycleofBabesia

新疆农业大学硕士学位论文蜱在动物身上叮咬的时间与动物感染巴贝斯虫的几率有一定的关系，如果让蜱在动物身上自由采食和繁殖，动物的感染率能达到90%。当子孢子进入动物，侵入动物的红细胞后，进行出芽生殖并裂解红细胞释放出裂殖子（merozoites）。大多数裂殖子在宿主红细胞内形成滋养....

图1-4TaqMan探针原理

新疆农业大学硕士学位论文PCR反应目的片段的扩增，更多的Taqman探针被水解，荧光信号值随之增加。常用的荧光报告基团的有FAM，TET，JOE，HEX或VIC等，3'端的荧光淬灭基团一般都为TAMRA，Taqman探针可以通过加入不同荧光基团标记的不同探针以进行....

本文编号：3980578