蓝舌病病毒4型VP5蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位的鉴定

发布时间：2024-05-30 23:50

　　蓝舌病(Bluetongue, BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)引起的,主要感染绵羊,山羊,牛和鹿等反刍动物的非接触性传染病。该病经媒介昆虫(库蠓,伊蚊等)传播,可以引起病畜高热,过度流涎,面部和舌头肿胀以及舌头发绀等。到目前为止,世界上已经发现26种BTV血清型。由于抗原变异以及各个血清型之间有限的免疫交叉保护力,这给BTV的免疫预防带来了极大地困难。因此,群特异性或型特异性表位疫苗的发展对BTV的防治具有重要的意义。 本研究首先对GenBank中各个地理分离株BTV4的S6序列进行比对,根据非编码区的保守性序列设计反转录引物。然后从BTV4感染的BHK-21细胞中提取基因组dsRNA,对VP5蛋白的目的基因进行RT-PCR,连接至pEASY-Blunt载体,并对其测序。根据测序结果,分别设计上下游引物,对VP5目的基因的编码区进行PCR,经双酶切后连接至原核表达载体pMALTM-c4x和Bac-to-Bac真核表达载体pFastBacTMHTA,构建重组质粒pMAL-VP5和pFast-VP5.将重组质粒pFast-VP5转化...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1BTV4dsRNA的提取以及S6的克隆Fig.2.1.ExtrationofdsRNA，andcloningofBTV4segment6encodingtheVPSprotein.Leftpanel(lane1):GenomicdsRNAextractedfromBTV4-infectedBHK-21cellswasrunon9%

图2.1BTV4dsRNA的提取以及S6的克隆Fig.2.1.ExtrationofdsRNA，andcloningofBTV4segment6encodingtheVPSprotein.Leftpanel(lane1):Genomicds....

图2.2重组质粒pMAL-VP5的双酶切和PCR鉴定Fig,2.2IdentificationofrecombinantplasmidpMAL-VP5byrestrictedenzymedigestionandPCRLeftpanel(lane1);pMAL-VP5digestedbyEcoRIandPst1;

双酶切后电泳鉴定大小分别为6600bp和1600bp，与预期结果相符。电泳鉴定PCR产物，结果与预期相符，在1600bp有特异条带（图2.2)。M1 M2■■2000bp1000bp1000bp■■图2.2重组质粒pMAL-VP5的双酶切和PCR鉴定Fig,2.2....

图2.3SDS-PAGE和Westernbk)t鉴定原核表达与纯化的重合蛋白VP5Fig.2.3.AnalysisofprokaryoticallyexpressedandpurifiedproteinVP5bySDS-PAGEandWesternblot

图2.3SDS-PAGE和Westernbk)t鉴定原核表达与纯化的重合蛋白VP5Fig.2.3.AnalysisofprokaryoticallyexpressedandpurifiedproteinVP5bySDS-PAGEandWesternb....

图3.1重组质粒pFast-VP5双_切鉴定

提取质粒pFast-VP5，对其进行双酶切,用1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定大小分别为4900bp与1500bp左右，与预期结果相符（图3.1)。M1H[5000bpbp 5000bp^H|H2000bp 3000bpmm1500bp翻bp ？50ssH1000b....

本文编号：3984853