食欲素A对绵羊黄体化颗粒细胞孕酮分泌相关基因表达调控的研究

发布时间：2024-06-01 09:09

　　食欲素A作为一种重要的神经肽类激素,通过与G蛋白偶联受体结合影响生殖功能。为研究食欲素A对绵羊黄体化颗粒细胞的基因表达的影响及其信号网络,参照本实验室已经建立的绵羊卵巢颗粒细胞培养体系进行细胞培养,在颗粒细胞内联合添加FSH、LH、E2,用ELISA进行鉴定是否黄体化;提取黄体化颗粒细胞组和添加Orexin A的黄体化颗粒细胞组的RNA,采用Illumina测序技术进行测序,用生物信息学方法对转录组数据进行分析,在测序数据质量控制合格的基础上,对差异表达的基因进行筛选、功能注释和富集分析;运用荧光定量PCR和Western blot对差异显著基因进行验证;其中筛选出的PRRT2可能参与cGMP-PKG、MAPK、Wnt等信号通路影响黄体化颗粒细胞孕酮分泌,所以对PRRT2进一步验证,在黄体化颗粒细胞和外加OrexinA的黄体化颗粒细胞添加不同浓度(0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L)PRRT2抑制剂(HY-10230),ELISA检测上清液中孕酮分泌量,WB检测添加HY-10230和Orexin A的黄体化颗粒细胞中PRRT2和StAR含量。结果表明,黄体化...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１转录组测序流程??Ｆｉｇ．?１?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｐｒｏｃｅｓｓ??

?和ＲＮＡ翻译以及挖掘潜在新功能性基因。??—??！?：?４?；?ｉ??Ｉ?ｔ?＇?ｔ?■?？?、??广＇ｉ?？??４．?＿??Ｌ?、．ｖ?－＿??ｉ．?．?＇?．?：＂??ｉ?；?，?－?＊?ｆ?．?？?＊??ｒ?—??ｉ?４?？?＊?＊＊?ｆ??ｉ．．?”：??：．－Ｉ?？－....

图２绵羊卵巢颗粒细胞??Ｆｉｇ．２?Ｏｖａｒｉａｎ?ｇｒａｎｕｌｏｓａ?ｃｅｌｌｓ??注：Ａ：原代颗粒细胞?Ｂ：Ｆ１代颗粒细胞??

?内蒙古农业大学硕士学位论文?２３??４实验结果??４．１卵巢颗粒细胞培养结果??体外培养卵巢颗粒细胞，镜检可见细胞形状为梭形，状态良好，传代生长稳定。??％?Ｂ?．??＊?＇?＂?■＇?＾?：＇?－Ｖ??；?：＇■；／＇?？；?＇?？?／?．？?＼?－?：?＾?＇??■?？广？....

图３卵巢颗粒细胞黄体化鉴定??

２４?食欲素Ａ对绵羊黄体化颗粒细胞孕酮分泌相关基因表达的调控研究???２５－Ｊ??ｒ。??ｉ：：ｌ?＿?圍??Ａ?Ｂ??图３卵巢颗粒细胞黄体化鉴定??Ｆｉｇ．３?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌｕｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｏｖａｒｉａｎ?ｇｒａｎｕｌｏｓａ?ｃｅｌｌｓ?....

图４细胞总ＲＮＡ质量检测结果??Ｆｉｇ．４?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ?ｔｏｔａｌ?ＫＮＡ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??

２４?食欲素Ａ对绵羊黄体化颗粒细胞孕酮分泌相关基因表达的调控研究???２５－Ｊ??ｒ。??ｉ：：ｌ?＿?圍??Ａ?Ｂ??图３卵巢颗粒细胞黄体化鉴定??Ｆｉｇ．３?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌｕｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｏｖａｒｉａｎ?ｇｒａｎｕｌｏｓａ?ｃｅｌｌｓ?....

本文编号：3985675