猪圆环病毒3型套式PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2024-06-04 19:14

　　为快速检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3全基因组保守区域设计特异性引物,建立PCV3套式PCR检测方法,并对采自安徽省部分地区的528份猪临床样品进行检测。结果显示,建立的方法仅对PCV3检测阳性,最低检测限为1.74×10拷贝/μL,与商品化检测试剂盒的符合率高;临床样品中PCV3总阳性检出率为20.45%(108/528)。建立的PCV3套式PCR方法可用于PCV3的临床样品检测。

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【部分图文】：

图2不同退火温度扩增结果

图1重组质粒标准品扩增结果2.3特异性试验

图4PCV3套式PCR特异性扩增的结果

图3一扩模板不同稀释度进行二扩的扩增结果2.5重复性试验

图1重组质粒标准品扩增结果

对套式PCR退火温度及二扩模板稀释比例进行筛选及优化,结果显示,当退火温度为58℃时扩增条带最清晰(图2),表明58℃为本方法的最佳退火温度;二扩模板进行50倍稀释时扩增出的条带最清晰且无杂带(图3),表明50倍为最佳稀释倍数。图2不同退火温度扩增结果

图3一扩模板不同稀释度进行二扩的扩增结果

将PCV3阳性重组质粒标准品按照10-1～10-10稀释成1.74×109拷贝/μL～1.74×100拷贝/μL共10个系列,作为模板进行套式PCR与普通PCR的灵敏度试验,结果如图5。图5A为套式PCR扩增结果,能够扩增出PCV3标准品质粒的最大稀释度为10-9,即最低检测限为....

本文编号：3989056