褪黑素在牛卵母细胞体外成熟过程中的作用研究

发布时间：2024-06-08 00:35

　　通过体细胞核移植技术,卵母细胞的重编程因子可将高度分化的体细胞重编程,形成重构克隆胚胎,并能发育成完整的动物个体。卵母细胞的质量和重编程能力是体细胞克隆技术最关键的限制因素之一。在体内正常发育过程中卵母细胞处于低氧环境,且卵泡液含有自由基清除剂和抗氧化酶,可保护卵母细胞免受氧化损伤。与体内成熟的卵母细胞相比,体外成熟(IVM)卵母细胞处于一个相对高氧的环境,并且缺乏自由基清除剂和抗氧化酶的保护,因而其活性氧水平较高,从而表现出较低的质量和发育潜力。活性氧的过量产生会引起氧化应激,破坏细胞膜并诱导细胞凋亡。褪黑素作为有效的自由基清除剂和广谱抗氧化剂,可直接清除活性氧并减少细胞氧化损伤。最近的研究表明,褪黑素存在于卵泡液中,同时在体外培养过程中补充褪黑素可提高卵母细胞的受精能力和发育能力,在早期胚胎发育期间补充褪黑素可显著改善SCNT胚胎的发育能力。然而,关于褪黑素如何改善卵母细胞质量和发育潜力的潜在机制需要进一步研究。另外,IVM期间添加褪黑素对后续胚胎发育的影响仍不清楚。因此,在这项研究中,我们通过在IVM培养基中补充褪黑素,探究其对体外牛卵母细胞质量和后续胚胎发育能力的影响机制。以下...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
综述部分
    第一章 卵母细胞与体细胞核移植胚胎
        1.1 体细胞核移植技术
        1.2 卵母细胞在克隆胚胎早期发育过程中的重要作用
            1.2.1 提供能量的线粒体
            1.2.2 介导减数分裂的纺锤体
            1.2.3 母源组蛋白及其变体
        1.3 表观遗传修饰在克隆胚胎早期发育过程中的作用
            1.3.1 组蛋白乙酰化
            1.3.2 组蛋白甲基化
            1.3.3 DNA甲基化
    第二章 褪黑素的功能与作用
        2.1 褪黑素的发现与生理功能
        2.2 褪黑素在生殖过程中的作用
试验部分
    第三章 褪黑素对卵母细胞体外成熟质量及其后续胚胎发育的影响
        3.1 材料和试剂
            3.1.1 材料来源
            3.1.2 仪器设备
            3.1.3 主要溶液及试剂耗材
        3.2 方法
            3.2.1 卵母细胞的体外成熟
            3.2.2 卵母细胞的免疫荧光染色
            3.2.3 卵母细胞 ROS 水平的测定
            3.2.4 卵母细胞早期凋亡的检测
            3.2.5 卵母细胞线粒体活性的检测
            3.2.6 体细胞核移植
            3.2.7 体外受精
            3.2.8 囊胚的免疫荧光染色
            3.2.9 囊胚细胞的差异染色
            3.2.10 囊胚细胞的凋亡检测
            3.2.11 数据统计分析
        3.3 结果
            3.3.1 褪黑素对卵母细胞成熟率的影响
            3.3.2 褪黑素对牛卵母细胞 ROS 水平和早期凋亡水平的影响
            3.3.3 褪黑素对牛卵母细胞线粒体活性的影响
            3.3.4 褪黑素对牛卵母细胞纺锤体形态的影响
            3.3.5 褪黑素牛卵母细胞表观遗传修饰的影响
            3.3.6 牛卵母细胞体外成熟过程中添加褪黑素对后续胚胎发育的影响
            3.3.7 牛卵母细胞体外成熟过程中添加褪黑素对后续胚胎质量的影响
            3.3.8 牛卵母细胞体外成熟过程中添加褪黑素对后续胚胎表观修饰的影响
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 褪黑素对体外成熟卵母细胞基因表达的影响
        4.1 材料和试剂
            4.1.1 材料来源
            4.1.2 仪器设备
            4.1.3 主要溶液及试剂耗材
        4.2 方法
            4.2.1 样品收集
            4.2.2 转录组测序
            4.2.3 转录组测序数据过滤与质控
            4.2.4 转录组测序数据比对分析
            4.2.5 样品间数据相关性分析
            4.2.6 差异表达基因筛选与分析
            4.2.7 差异表达基因深入挖掘
            4.2.8 实时荧光定量PCR
        4.3 结果
            4.3.1 转录组测序样品的数据过滤与质量评估
            4.3.2 转录组测序数据的比对情况
            4.3.3 基于基因表达水平的样品间相关性分析
            4.3.4 差异表达基因筛选结果
            4.3.5 组间差异基因的基因本体功能显著性富集分析
            4.3.6 组间差异基因的Pathway显著性富集分析
            4.3.7 差异表达基因qPCR验证结果
        4.4 讨论
        4.5 小结
全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：3991192