猪肺炎支原体和猪圆环病毒2型二联基因工程疫苗的研制

发布时间：2024-06-14 01:57

　　猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine,MPS)是一种慢性呼吸道传染病,也称为猪气喘病或猪地方性肺炎(swine enzootic pneumonia,EP)。猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起MPS的主要病原体。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是造成猪断奶后多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原体。临床上Mhp常会与PCV2等病原体协同感染,增加相关疾病的严重性和潜在的持久性,最终导致死亡率上升。目前,防控Mhp和PCV2的主要手段是疫苗免疫。但传统的商业疫苗以灭活疫苗和弱毒疫苗为主,其普遍存在免疫原性不好、免疫反应持续时间不稳定或者毒力容易回复等缺点。而多联疫苗可实现接种一针预防多种疾病的目的,尤其在疫病长期共存的情况下,联苗将成为未来防疫的主要类型。通过基因工程方法制备的疫苗能同时表达多种疾病的抗原蛋白,达到联合疫苗的使用效果,同时也解决了常规联苗抗原组分相容性的问题...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３．３基因与载体的双酶切??Ｆｉｇ?３．３?Ｄｏｕｂｌｅ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｅｎｅｓ?ａｎｄ?ｖｅｃｔｏｒｓ??

通过相应引物对叩９７ｒ八ｒ／＾２和ｃａｐ基因进行ＰＣＲ扩增后，与ｐＥＴ?３２ａ载体一??同使用相应的限制性内切酶进行双酶切，对酶切产物片段通过琼脂糖凝胶电泳分离，电泳??结果如图３．３所示。样品从左往右依次为ＤＬ?２０００?Ｍａｒｋｅｒ，／＊／＾／＆〇尺１＋＆／１?（３００?ｂｐ....

图３．４重组质粒ＰＣＲ鉴定??Ｆｉｇ?３．４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??

鉴定正确的四种重组质粒分别转入大肠杆菌ＢＬ２１?（ＤＥ３）中，进行诱导表达，菌体分??离与破碎，并进一步用镍柱进行纯化。对纯化洗脱液进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，以及考马斯亮??蓝染色鉴定（如图３．５）。样品从左往右依次为蛋白Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔｈｅｒｍｏ?２６６１６）、ｒＰ９７Ｒｌ、....

图３．５纯化后蛋白的ＳＤＳ＾ＰＡＧＥ鉴定??Ｆｉｇ?３．５?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｂｙ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ??

２５０?匕谈气’孩、满驚士汾！??图３．４重组质粒ＰＣＲ鉴定??Ｆｉｇ?３．４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??４．３重组蛋白的诱导表达与纯化??鉴定正确的四种重组质粒分别转入大肠杆菌ＢＬ２１?（ＤＥ３）中，进行诱导表....

图４．４?Ｐ９７Ｒ１Ｐ４６Ｐ４２嵌合蛋白三维结构模拟图??

４结果分析??４．１双焚光重组杆状病毒载体的鉴定??对Ｐ９７Ｒ１Ｐ４６Ｐ４２嵌合蛋白三维结构的模拟如图４．４所示，青色区域为Ｐ９７Ｒ１蛋白，紫??色区域为Ｐ４６蛋白，橙色区域为Ｐ４２蛋白，绿色区域为Ｐ９７Ｒ１和Ｐ４６、Ｐ４６和Ｐ４２之间的??两个柔性接头蛋白。??图４．４?Ｐ９７....

本文编号：3993973