羊口疮病毒杨凌株和泸西株的分离鉴定及毒力致弱研究

发布时间：2024-06-14 20:05

　　羊口疮，又叫羊传染性脓疱皮炎，是由羊口疮病毒引起的绵羊和山羊的急性接触传染性的病毒病。羊口疮在世界范围内流行，常发生于夏末与秋冬季节，在我国新疆、青海、云南、山东、四川、陕西等十多个省份都有相应的报道，给我国的养羊业造成了巨大的经济损失。在流行地区，羊口疮发病率高达80%⁹0%。本文分离鉴定了陕西杨凌和云南泸西地区羊口疮病毒的流行毒株，通过微量细胞交叉中和试验鉴定了两株羊口疮病毒在中和水平的抗原差异性，同时将两株病毒在犊牛睾丸原代细胞上连续传代至第86代，分别把第86代病毒划痕接种于3只30⁴5日龄的羔羊，检测病毒弱化效果。试验结果如下： 1.羊口疮病毒杨凌和泸西野毒株的分离与鉴定 第5代病毒能引起明显的细胞病变，其中第5代杨凌株病毒滴度为107.66TCID50/mL，泸西株病毒滴度为108.2TCID50/mL；杨凌株病毒PCR扩增片段与设计引物的序列的相似度分别为96.57%和96.43%，泸西株病毒与设计引物的序列相似度分别为97.75%，96.33%，两株病毒B2L基因扩增片段的相似性为96.93%，F1L基因扩增片段的相似性为96...

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【部分图文】：

图1-1羊口疮病毒毒力/致病性相关分子的活性关系

分子相互作用层面来解释病毒的进化学说(Lateef2011;Seetetal.2003)（4）dUTPaseCottone等人在研究中将羊口疮病毒弱毒株D1701的dUTPase基因在细菌内以硫氧还原融合蛋白的形式表达出来，体外实验表明，羊口疮病毒的dUTPa....

图1-1羊口疮发病羊照片A.出血B.结痂Fig.1-1Photoesoflambinfectedbyorfvirus

醇方法提取第5代病毒液的DNA，参照本实验室CR检测方法(李前瑞等2013)进行检测。B2L、F11和HQ221964.1的基因序列设计。PCR反应体、MgCl22μL、ExTaq0.25μL、模板(Template)2μL、引CR反应程序为：95℃预变性....

图1-5正常犊牛睾丸原代细胞（20×）

两株病毒引起的细胞病变至第5代时，接种的犊牛睾丸原代细胞产生明显细胞病变。病变细变圆、聚堆等现象，后期犊牛睾丸原代细胞发生皱缩、脱落，CPE），而正常对照的犊牛睾丸原代细胞生长状态良好（图1-5）。proteinsubstanceinnecrotictissue图....

图1-4杨凌分离株接毒72h后发生细胞病变的犊牛睾丸原代细胞(20×)

两株病毒引起的细胞病变至第5代时，接种的犊牛睾丸原代细胞产生明显细胞病变。病变细变圆、聚堆等现象，后期犊牛睾丸原代细胞发生皱缩、脱落，CPE），而正常对照的犊牛睾丸原代细胞生长状态良好（图1-5）。proteinsubstanceinnecrotictissue图....

本文编号：3994357