禽4型腺病毒（FAdV-4）亚单位疫苗的研究

发布时间：2024-07-07 10:38

　　禽4型腺病毒(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)对鸡具有较强的致病性,特别是对3至5周龄的肉鸡,可导致30-80%死亡率,它已成为近30年来导致家禽行业经济损失的主要原因之一。肝脏组织是FAdV-4感染的主要靶器官,而感染病毒的鸡通常表现为心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS),典型症状为心包中有清澈的、淡黄色的液体聚集,并伴有肝炎和肾炎。FAd V-4有很强的感染性,可以水平传播,也可以垂直传播。FAdV-4可以从受感染的肝匀浆中分离出来,并可通过几种实验室诊断方法检测(琼脂凝胶扩散试验,间接免疫荧光试验,ELISA,限制性酶切和PCR)。尽管组织灭活疫苗已经应用于控制这种疾病,但新型疫苗可能能够更好的防控FAdV-4造成的疫病,本文研究了FAdV-4的不同来源的亚单位疫苗,研究结果如下。1.FAdV-4的分离与鉴定2015年10月采集陕西省大荔县某肉鸡养殖场HPS疑似病料经匀浆处理,接种鸡胚、CEF细胞、LMH细胞对病原分离培养,经PCR、间接免疫荧光、透射电子显微镜和动物回归试验对病原体进行鉴定。结果显示可用...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
文献综述
    第一章 禽4型腺病毒的研究进展
        1.1 禽4型腺病毒的概述
            1.1.1 FAdV-4的分类地位、结构和理化特征
            1.1.2 FAdV-4的流行病学
            1.1.3 FAdV-4的发病机理
        1.2 FAdV-4的诊断
            1.2.1 临床病理分析和透射电镜
            1.2.2 分子技术
            1.2.3 血清学技术
        1.3 病毒的分离纯化
        1.4 FAdV-4的疫苗
        1.5 腺病毒的病毒样颗粒
            1.5.1 腺病毒病毒样颗粒的概述
            1.5.2 Ad3Pt-Dd的入胞机制
            1.5.3 Ad3Pt-Dd在疫苗研究领域的应用
            1.5.4 腺病毒的病毒样颗粒作为亚单位疫苗
试验研究
    第二章 FAdV-4的分离鉴定
        2.1 材料
            2.1.1 病料
            2.1.2 细胞、鸡胚和试验动物
            2.1.3 试剂
            2.1.4 试验仪器
        2.2 方法
            2.2.1 分子生物学鉴定
            2.2.2 病毒分离
            2.2.3 动物回归试验
        2.3 结果
            2.3.1 分子生物学鉴定
            2.3.2 病毒分离鉴定
            2.3.3 遗传进化分析
            2.3.4 动物回归试验
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 FAdV-4的衣壳蛋白fiber-1、fiber-2、pentonbase和hexon的免疫保护力
        3.1 材料
            3.1.1 病毒,细菌菌株,细胞株及试剂
            3.1.2 试验动物
            3.1.3 试剂
            3.1.4 仪器
        3.2 方法
            3.2.1 重组质粒的构建与鉴定
            3.2.2 重组蛋白的表达与纯化
            3.2.3 Westernblot
            3.2.4 免疫和攻毒试验
            3.2.5 组织病理学观察及免疫组织化学检测组织病毒分布
            3.2.6 酶联免疫吸附实验(ELISA)
            3.2.7 统计分析
        3.3 结果
            3.3.1 重组质粒的构建与蛋白表达
            3.3.2 重组蛋白免疫后的体液免疫应答
            3.3.3 临床症状与存活率
            3.3.4 剖检病理变化观察
            3.3.5 微观病变
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 FAdV-4病毒样颗粒的免疫保护力
        4.1 材料
            4.1.1 细胞和病毒
        4.2 方法
            4.2.1 构建重组腺病毒(rhAd-fiber-1、rhAd-fiber-2、rhAd-penton)
            4.2.2 Westernblot
            4.2.3 电镜负染
            4.2.4 转导293T细胞
            4.2.5 FAdV-4VLPs的内化
            4.2.6 免疫和攻毒试验
            4.2.7 组织病理学观察及免疫组织化学检测组织病毒分布
            4.2.8 酶联免疫吸附实验(ELISA)
            4.2.9 分离外周血单核细胞
        4.3 结果
            4.3.1 构建重组腺病毒(rhAd-fiber-1、rhAd-fiber-2、rhAd-penton)
            4.3.2 生成FAdV-4病毒样颗粒
            4.3.3 FAdV-4VLPs的内化
            4.3.4 重组蛋白免疫后的细胞和体液免疫应答
            4.3.5 剖检病理变化观察
            4.3.6 组织病理学和免疫组织化学分析
            4.3.7 攻毒保护性试验
        4.4 讨论
        4.5 小结
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：4003585