t10,cl2 CLA对奶牛乳腺细胞SREBP的调控及抵制乳脂合成的机理研究

发布时间：2024-07-09 04:59

　　t10,c12 CLA可通过降低乳腺上皮细胞内核转录因子n SREBP1的水平,引起牛奶乳脂率降低50%,降低牛乳营养成分,影响乳品质。本实验以牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)为模型,分别从转录、翻译后加工修饰以及降解调控水平研究t10,c12 CLA降低n SREBP1水平的调控机制。为缓解低乳脂症(MFD),提高乳品质提供参考。试验一t10,c12 CLA对乳脂合成网络的影响以MAC-T为模型,检测乳脂合成网络基因的表达,观察脂滴分泌情况。不同梯度t10,c12 CLA(0,75,150和300 n M)处理MAC-T,western blot筛选t10,c12 CLA对n SREBP1的最佳抑制浓度,用它处理MAC-T,RT-q PCR和western blot检测乳脂合成网络的m RNA丰度和蛋白丰度。结果显示,1)MAC-T能表达乳脂合成网络中的21个基因,能分泌脂滴;2)150 n M的t10,c12 CLA对n SREBP1的抑制效果最佳,并可显著降低ACACA,FASN,SCD1的m RNA丰度和SCD1的蛋白丰度。结果表明,MAC-T能作为本研究的模型,t10,c12 ...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文献综述
    1 CLA的来源及制备
    2 CLA的生物学活性
    3 牛奶中CLA的来源
    4 乳脂的合成
    5 MFD现象
        5.1 乙酸/β-羟丁酸不足学说
        5.2 VB12/甲基丙二酸不足学说
        5.3 葡萄糖/胰岛素学说
        5.4 反式脂肪酸理论
    6 脂肪酸合成通路中的转录因子
        6.1 甾醇调节元件结合蛋白(SREBPs)
        6.2 甲状腺激素应答蛋白Stop 14
        6.3 过氧化物酶体增殖物激活受体
    7 研究内容及目标
    8 研究意义
第二章 T10, C12 CLA对乳脂合成网络的影响
    1 试验设计
    2 试验材料
        2.1 试验器材
        2.2 试验试剂
        2.3 引物
    3 试验方法
        3.1 RNA的提取和反转录
        3.2 PCR检测乳脂合成网络表达
        3.3 油红O染色
        3.4 蛋白检测
        3.5 RT-q PCR
    4 试验结果
        4.1 MAC-T生长情况
        4.2 MAC-T脂滴分泌
        4.3 MAC-T内乳脂合成网络表达结果
        4.4 t10, c12 CLA抑制n SREBP1表达最佳浓度的确定
        4.5 t10, c12 CLA对FA吸收、转运、合成的影响
        4.6 t10, c12 CLA对THRSP的影响
    5 讨论
        5.1 MAC-T的乳脂合成情况
        5.2 t10, c12 CLA对n SREBP1的影响
        5.3 t10, c12 CLA对乳脂合成的调控
        5.4 THRSP在t10, c12 CLA调控n SREBP1过程中的影响
    6 小结
第三章 T10, C12 CLA在转录和翻译后加工水平对SREBP1的调控机制研究
    1 试验设计
    2 试验材料
        2.1 试验仪器
        2.2 试验试剂
    3 试验方法
    4 试验结果
        4.1 t10, c12 CLA对SREBP1上游基因m RNA的影响
        4.2 t10, c12 CLA对PPARG、SCAP和INSIG1蛋白表达的影响
    5 讨论
        5.1 t10, c12 CLA对SCAP和INSIG1的影响
    6 小结
第四章 T10, C12 CLA在SREBP1降解过程的影响
    1 试验设计
    2 试验材料
    3 试验方法
        3.1 RT-q PCR、western blot
        3.2 ATP含量测定
    4 试验结果
        4.1 MG-132对MAC-T影响效果
        4.2 添加G-MG-132后t10, c12 CLA对ATP和乳脂合成的影响
        4.3 t10, c12 CLA对SREBP1降解过程的影响
    5 讨论
        5.1 MG-132对MAC-T的抑制效应
        5.2 t10, c12 CLA对细胞内ATP水平的影响
        5.3 26S蛋白酶体在t10, c12 CLA调控SREBP1过程中的影响
    6 小结
第五章 结论、创新点及后续展望
    1 结论
    2 创新点
    3 展望
参考文献
附录
个人简介
致谢



本文编号：4004435