表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组新城疫病毒的构建及其生物学特性的研究

发布时间：2024-11-06 20:28

　　猪圆环病毒2型（PCV2）属于圆环病毒科、圆环病毒属，是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、皮炎肾病综合征（PDNS）和母猪繁殖障碍等症状的主要病原物，所有这些症状被统称为猪圆环病毒相关病(PCVAD)。自1991年PMWS在加拿大被首次报道至今，该病目前已经遍布世界各地，在我国猪群中感染发病情况也十分普遍，给养猪业造成了严重的经济损失。 PCV2无囊膜，其基因组为共价闭合、单股环状负链DNA，大小约1.76kb。PCV2ORF2编码的的结构蛋白Cap是其最主要的免疫保护性抗原，能诱导动物机体产生特异性中和抗体，是研制PCV2新型疫苗的理想靶抗原。国内外现有的PCV2商品化疫苗因其工艺繁琐、价格昂贵限制了疫苗的普及应用。 新城疫病毒（NDV）反向遗传操作技术的发展为NDV作为疫苗载体防制哺乳动物疾病开辟了道路。本研究的目的是为了探索PCV2的衣壳蛋白重组NDV后在哺乳动物细胞中的表达情况，从而为研制新型PCV2疫苗提供一种思路。 本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株的反向遗传操作平台，成功构建表达PCV2aCap蛋白的重组病毒rLa-PCV2/Cap；为了进一步增...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
1 引言
    1.1 病原学
    1.2 流行病学
    1.3 临诊症状及病理变化
    1.4 PCV2 的致病机理
    1.5 PCV2 的分子生物学
    1.6 PCV2 疫苗研究进展
        1.6.1 PCV2 灭活疫苗
        1.6.2 PCV2 弱毒疫苗
        1.6.3 PCV2 基因工程疫苗
    1.7 NDV 作为活病毒
2 材料与方法
    2.1 细胞、病毒和质粒
    2.2 高免血清及实验动物
    2.3 主要试剂与仪器
    2.4 方法
        2.4.1 引物设计与合成
        2.4.2 cap 及其改造后基因的扩增和序列分析
        2.4.3 重组病毒基因组全长 cDNA 的构建
        2.4.4 病毒的拯救
        2.4.5 重组病毒的 RT-PCR 鉴定
        2.4.6 重组病毒的间接免疫荧光试验（IFA）
        2.4.7 重组病毒在鸡胚内生长特性测定
        2.4.8 重组病毒致病性实验
            2.4.8.1 鸡胚平均致死时间（MDT）测定
            2.4.8.2 重组病毒的鸡脑内致病指数（ICPI）测定
            2.4.8.3 重组病毒的静脉内致病指数（IVPI）测定
3 结果与分析
    3.1 重组 NDV 基因组全长 cDNA 的构建
    3.2 重组病毒的拯救
    3.3 重组病毒 RT-PCR 鉴定
    3.4 IFA 检测外源蛋白表达
        3.4.1 IFA 检测 PCV2-Cap 蛋白的表达
        3.4.2 IFA 检测改造后 Cap 蛋白的表达
    3.5 重组病毒鸡胚内的生长特性
    3.6 重组病毒的致病性实验
4 讨论
5 结论
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：4011554