绵马酚抑制多粘菌素耐药关键蛋白MCR-1的机制研究

发布时间：2024-12-18 07:18

　　 mcr-1是近几年发现的一种多粘菌素耐药基因,该基因可随质粒在不同菌株间快速传播,目前已在多个国家及地区被检出,本研究团队前期筛选发现联合使用绵马酚与多粘菌素时可以抑制mcr-1阳性大肠杆菌的生长。为了评价两者联合使用时的抑菌效果,本研究采用棋盘稀释法对mcr-1阳性大肠杆菌进行了绵马酚与多粘菌素联合药敏实验,结果显示,当联合使用绵马酚与多粘菌素时相比单独使用多粘菌素时,多粘菌素的MIC由8μg/m L降低至1μg/m L,FIC指数小于0.5,二者属于协同作用。以终浓度为32μg/m L绵马酚与10μg/m L多粘菌素联合使用,进一步通过平板计数和透射电镜检测其杀菌效果和大肠杆菌菌体的破损程度,结果显示,当联合使用绵马酚与多粘菌素时,大肠杆菌在2 h～8 h逐渐全部死亡,大肠杆菌菌体破损最严重;但不管是单独使用绵马酚还是多粘菌素,大肠杆菌均不能被彻底杀灭。采用氯仿/甲醇/水混合相萃取法分别提取mcr-1阳性大肠杆菌JD08菌株和含有16μg/m L的绵马酚的mcr-1阳性大肠杆菌JD08菌株中类脂A,利用质谱仪检测类脂A的结构,结果显示在绵马酚存在的情况下,MCR-1蛋白的作用受到抑...

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【部分图文】：

图6 Biacore测定绵马酚与MCR-1蛋白之间相互作用力

图5重组蛋白MCR-1的SDS-PAGE检测3讨论

图1 绵马酚联合多粘菌素对mcr-1阳性大肠杆菌的杀菌曲线

通过电镜观察正常培养的JD08菌株、10μg/mL多粘菌素作用的JD08菌株及10μg/mL多粘菌素+32μg/mL绵马酚的作用的JD08菌株，结果显示mcr-1阳性大肠杆菌JD08菌体形态较好，外膜完整，仅有轻微形变，可能是制作切片过程中的损伤（图2A);10μg/mL的多....

图2 透射电镜观察mcr-1阳性大肠杆菌JD08形态

采用氯仿/甲醇/水混合相萃取法提取类脂A，如图3A所示，在mcr-1阳性大肠杆菌JD08中分离出的类脂大小为1920.3U，相比于未经修饰的正常的类脂A(1797.1U）增加了大约123U。而如图3B所示，在绵马酚存在的情况下，MCR-1蛋白的作用受到抑制，发生转移的酰....

图3 质谱检测JD08菌株中类脂A的变化情况

图2透射电镜观察mcr-1阳性大肠杆菌JD08形态2.5MCR-1蛋白的表达与纯化结果

本文编号：4017137