地克珠利对柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5表达的影响

发布时间：2024-12-19 02:26

　　 建立地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染鸡动物模型,收集获得E. tenella第2代裂殖子,通过PCR扩增E. tenella第2代裂殖子丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5(serine/threonine protein phosphatase type 5,Et PP5)基因编码序列,构建pET-28a-Et PP5表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达融合蛋白,镍亲和层析柱法纯化表达蛋白并免疫BABL/c小鼠制备Et PP5抗血清。采用免疫荧光和Western-blot技术检测第2代裂殖子Et PP5蛋白的表达。结果显示,30℃时,用1 mmol/L的IPTG诱导pET-28a-Et PP5表达的融合蛋白大多以包涵体形式存在。Et PP5主要分布在E. tenella第2代裂殖子的细胞质中,细胞核也有少量分布。经地克珠利处理后,E. tenella第2代裂殖子Et PP5蛋白表达降低了47.65%(P<0.01)。提示,地克珠利可能通过作用Et PP5发挥抗球虫作用,这为地克珠利抗球虫作用机理的阐述提供了理论依据。

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

图5 Et PP5免疫荧光定位分析

图4E.tenella第2代裂殖子EtPP5蛋白表达的Western-blot检测此外，PP5还充当着凋亡的生理抑制剂[15]。细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosissignal-regulatingkinase1,ASK1）是MAPK家族成员之一，多种应激损伤和促....

图1 Et PP5目的基因的PCR产物

以pMD-EtPP5为模板，PCR扩增EtPP5基因ORF序列，序列大小为1647bp（图1）。胶回收的PCR产物与pET-28a（+）载体经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后进行连接并转化DH5α感受态细胞，提取质粒，测序分析获得的重组表达质粒pET-28a-EtP....

图2 Et PP5原核表达蛋白的电泳分析

将pET-28a-EtPP5转化BL21(DE3）感受态细胞。挑取单菌落，接种到含有Kana抗性的LB培养基中，37℃培养至D600值达0.4～0.6左右，用IPTG诱导表达，结果（图2）显示，30℃诱导后第1～9小时均有蛋白表达，大小约为60.82ku，蛋白主要以包涵体形....

图3 镍亲和层析法进行蛋白的纯化

图2EtPP5原核表达蛋白的电泳分析2.3EtPP5蛋白表达的Western-blot分析

本文编号：4017508