牛细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

发布时间：2025-03-29 21:50

　　 为建立一种快速检测牛细小病毒（BPV）的方法,本研究通过PCR扩增BPV VP2基因,构建pProHTa-BPV-VP2重组表达载体,转化后获得重组大肠杆菌,通过诱导表达获得VP2重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠（100μg/只）,经细胞融合、克隆和筛选共获得了5株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为5G9、2B5、6A3、7E8和2B6。经鉴定,其分泌抗体亚型分别为IgG2a、IgG2b、IgM、IgM和IgA。间接免疫荧光结果显示,5株单克隆抗体（MAb）与BPV均可发生特异性反应。同时,将纯化后的BPV VP2重组蛋白免疫新西兰兔,制备兔抗BPV VP2多抗。利用制备的2B5作为检测抗体,BPV VP2多抗作为捕获抗体,初步建立检测BPV的双抗体夹心ELISA方法。该方法的特异性试验结果显示,除BPV外,与牛轮状病毒、猪伪狂犬病毒、猪传染性肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、牛病毒性腹泻病毒均不发生反应。敏感性试验结果显示,该方法对BPV最低检出量为3.125×10^2.8TCID50/mL。重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。利用该方法对269份临床猪腹泻...

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图1重组质粒的酶切鉴定（A）及VP2重1000bpA:M:DL8000DNAMarker;1:pProHTa-BPV-VP2digestedwithSalVP2digestedwithSalI

V的BT细胞作用后，进行IFA鉴定，结果显示5株MAb上清均与BPV反应，显示特异性荧光，对照组未见特异性荧光（图2）。表明5株MAb与BPV均可发生特异性反应。8000bp5000bp3000bp2000bpM123A:M:DL8000DNAMarker;1:pProHTa-B....

本文编号：4037695