监测山羊中β 2 -激动剂违禁使用的miRNA生物标志物及作用机理研究
发布时间：2025-04-14 22:28
畜牧业中β2-激动剂的违禁使用问题一直是国内外关注的热点,当前虽然已经基于β2-激动剂的违禁使用建立了很多检测方法,如仪器法、免疫法、传感器法等,但是现有方法都是基于已知药物。β2-激动剂类药物种类多、更新快,在畜牧生产中使用了新的β2-激动剂类药物,则上述已建立的方法检测不出来,这些有问题的动物、畜产品将躲过监管部门的监测,进入食物链,危害消费者的健康。因此,有必要建立更为灵敏有效的方法,以实现对该家族药物中逃逸药物尤其是新药的检测。β2-激动剂类药物有着共同的作用机理,研究β2-激动剂类药物在分子水平对动物生理的影响,不仅可以发现同家族中已知的药物,而且可以实现对新药和逃逸药物的监测。在之前的研究中,我们已经确立了一组转录水平的生物标志物（mRNA）用于实验山羊中β2-激动剂违禁使用的监测。miRNA（microRNA）是真核生物中广泛存在的一种长度为21-23nt的RNA分子,与mRNA相比更稳定,且可以调控mRNA的表达,更加灵...
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 引言
1.1 背景
1.2 β2-激动剂及作用机理
1.3 β2-激动剂检测技术
1.3.1 仪器分析技术
1.3.1.1 高效液相色谱法
1.3.1.2 液相色谱串联质谱法
1.3.1.3 气相色谱串联质谱法
1.3.1.4 液相色谱飞行时间质谱法
1.3.1.5 电喷雾电离质谱法
1.3.2 免疫分析技术
1.3.2.1 酶联免疫法
1.3.2.2 免疫层析试纸条法
1.3.3 传感器
1.3.3.1 化学传感器
1.3.3.2 生物传感器
1.4 生物标志物
1.4.1 转录水平
1.4.1.1 mRNA
1.4.1.2 microRNA
1.4.1.3 lncRNA
1.4.1.4 Urine marker
1.4.2 代谢水平
1.4.2.1 光谱和色谱技术
1.4.2.2 核磁共振(NMR)技术
1.4.2.3 高分辨率色谱-质谱联用技术
1.4.3 蛋白水平
1.5 生物统计学分析
1.6 研究意义和主要内容
第二章 体外miRNA标志物的筛选与验证
2.1 前言
2.2 材料和方法
2.2.1 骨骼肌细胞提取及处理
2.2.2 miRNA测序
2.2.3 靶基因预测
2.2.4 目的miRNA的选择
2.2.5 QRT-PCR反应
2.2.6 数据处理与分析
2.3 结果与分析
2.3.1 细胞鉴定结果
2.3.2 miRNA测序结果
2.3.3 miRNA的选择及基因表达网络构建
2.3.4 体外qRT-PCR验证结果
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 体内miRNA标志物的验证
3.1 前言
3.2 材料和方法
3.2.1 动物实验
3.2.2 目的miRNA的选择
3.2.3 QRT-PCR反应
3.2.4 数据处理与分析
3.3 结果与分析
3.3.1 体内qRT-PCR验证结果
3.3.2 羊尿液miRNA标志物验证结果
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 β2-激动剂相关miRNAs与 ADRB2 调控机制研究
4.1 前言
4.2 材料和方法
4.2.1 细胞培养及转染
4.2.2 qRT-PCR反应
4.2.3 双荧光素酶分析
4.2.4 数据处理和分析
4.3 结果与分析
4.3.1 转染类似物及抑制剂结果
4.3.2 双荧光素酶实验结果
4.3.3 VIP分析结果
4.4 讨论
4.5 结论
第五章 基于代谢组学的β2-激动剂作用机理研究
5.1 前言
5.2 材料和方法
5.2.1 细胞处理
5.2.2 样品前处理
5.2.3 数据采集
5.2.4 数据处理与统计学分析
5.3 结果与分析
5.3.1 方法学评价
5.3.2 多元统计分析
5.3.3 差异代谢物鉴定
5.3.4 通路与机理分析
5.4 讨论
5.5 小结
第六章 论文原创性
第七章 全文结论
参考文献
附录 A
致谢
作者简历
本文编号：4039635
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 引言
1.1 背景
1.2 β2-激动剂及作用机理
1.3 β2-激动剂检测技术
1.3.1 仪器分析技术
1.3.1.1 高效液相色谱法
1.3.1.2 液相色谱串联质谱法
1.3.1.3 气相色谱串联质谱法
1.3.1.4 液相色谱飞行时间质谱法
1.3.1.5 电喷雾电离质谱法
1.3.2 免疫分析技术
1.3.2.1 酶联免疫法
1.3.2.2 免疫层析试纸条法
1.3.3 传感器
1.3.3.1 化学传感器
1.3.3.2 生物传感器
1.4 生物标志物
1.4.1 转录水平
1.4.1.1 mRNA
1.4.1.2 microRNA
1.4.1.3 lncRNA
1.4.1.4 Urine marker
1.4.2 代谢水平
1.4.2.1 光谱和色谱技术
1.4.2.2 核磁共振(NMR)技术
1.4.2.3 高分辨率色谱-质谱联用技术
1.4.3 蛋白水平
1.5 生物统计学分析
1.6 研究意义和主要内容
第二章 体外miRNA标志物的筛选与验证
2.1 前言
2.2 材料和方法
2.2.1 骨骼肌细胞提取及处理
2.2.2 miRNA测序
2.2.3 靶基因预测
2.2.4 目的miRNA的选择
2.2.5 QRT-PCR反应
2.2.6 数据处理与分析
2.3 结果与分析
2.3.1 细胞鉴定结果
2.3.2 miRNA测序结果
2.3.3 miRNA的选择及基因表达网络构建
2.3.4 体外qRT-PCR验证结果
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 体内miRNA标志物的验证
3.1 前言
3.2 材料和方法
3.2.1 动物实验
3.2.2 目的miRNA的选择
3.2.3 QRT-PCR反应
3.2.4 数据处理与分析
3.3 结果与分析
3.3.1 体内qRT-PCR验证结果
3.3.2 羊尿液miRNA标志物验证结果
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 β2-激动剂相关miRNAs与 ADRB2 调控机制研究
4.1 前言
4.2 材料和方法
4.2.1 细胞培养及转染
4.2.2 qRT-PCR反应
4.2.3 双荧光素酶分析
4.2.4 数据处理和分析
4.3 结果与分析
4.3.1 转染类似物及抑制剂结果
4.3.2 双荧光素酶实验结果
4.3.3 VIP分析结果
4.4 讨论
4.5 结论
第五章 基于代谢组学的β2-激动剂作用机理研究
5.1 前言
5.2 材料和方法
5.2.1 细胞处理
5.2.2 样品前处理
5.2.3 数据采集
5.2.4 数据处理与统计学分析
5.3 结果与分析
5.3.1 方法学评价
5.3.2 多元统计分析
5.3.3 差异代谢物鉴定
5.3.4 通路与机理分析
5.4 讨论
5.5 小结
第六章 论文原创性
第七章 全文结论
参考文献
附录 A
致谢
作者简历
本文编号：4039635
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/4039635.html
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