鸡Rab5a与恒定链的结合特性及其在真核细胞的共定位研究

发布时间：2025-04-15 03:08

　　 Rab5a是胞内转运蛋白,而恒定链（invariant chain, Ii）则是协助主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex, MHC）Ⅱ分子装配成熟以及递呈抗原肽的免疫分子。长期以来,Ii的胞内途径机制并不清楚。本研究旨在探明鸡（Gallus gallus） Rab5a的结构特征及参与Ii在胞内转运中的作用。首先,用自行设计的引物克隆鸡Rab5a基因（GenBank No. XM₀15281490）,构建含鸡cIi、cIi突变体(Ii_D81-87aa和Ii_D91-99aa)的重组表达载体;其次,应用软件比对鸡和小鼠（Mus musculus） Rab5a蛋白质结构。最后,分别将Rab5a和cIi转染小鼠树突状细胞系DC2.4细胞,应用免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察鸡Rab5a与cIi和c Ii_D81-87aa和cIi_D91-99aa在真核细胞内的定位与共定位。应用GST pull-down和Western blot检测鸡Rab...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
    1.2 引物设计与合成
    1.3 目的基因的克隆与鉴定
    1.4 Rab5a的蛋白质结构分析
    1.5 构建重组质粒
    1.6 细胞培养、真核转染、免疫荧光染色和共聚焦显微镜观察
    1.7 重组菌的构建、表达和鉴定
    1.8 表达蛋白的纯化与GST pull-down检测目的蛋白间的相互作用
2 结果与分析
    2.1 目的基因的克隆与鉴定
    2.2 鸡和小鼠Rab5a的结构分析与比较
    2.3 鸡Rab5a和Ii在真核细胞中的定位特征
    2.4 鸡Ii与Rab5a共定位的分子结构特征
    2.5 鸡Rab5a和Ii基因原核表达的分子免疫学特征
3 讨论
4 结论



本文编号：4039973