克隆猪与人工授精猪胎盘发育的比较研究

发布时间：2017-06-09 19:17

  本文关键词：克隆猪与人工授精猪胎盘发育的比较研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：克隆又称体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT),该技术已在多种哺乳动物中成功建立并被逐渐应用。目前,猪的体细胞克隆仍然有很多问题,首先,猪的克隆效率不足1%;其次,超过50%的克隆仔猪在断奶前死亡。这两个主要问题严重制约着猪克隆技术的发展。胎儿的宫内生长发育高度依赖于胎盘的形态大小和功能。很多研究表明,胎盘发育缺陷是抑制克隆胚胎生长发育的主要原因之一。但是克隆动物产后的高死亡率与胎盘异常的相关性研究只在个别克隆哺乳动物中有报道,目前还没有研究报道胎盘发育状况与克隆猪出生后存活率的关系。因此,研究掌握克隆猪胎盘的发育状况将对改善或提高猪的克隆效率以及出生后存活率具有重要意义。本研究通过比较克隆猪与人工授精猪(Artificial insemination,AI)的胎盘相关性状、组织形态、基因m RNA及蛋白表达水平,从而探究胎盘发育状况与克隆猪产后存活率的关联性。主要研究结果如下:(1)克隆猪的窝均产仔数明显低于人工授精猪(4.5头VS.11.8头),克隆猪的死胎率和出生后4天内的死亡率分别达到20.7%和51.7%。(2)出生活的克隆猪与AI猪的仔猪出生重和胎盘发育相关指标比较显示,S-LB组的仔猪出生重、胎盘面积、胎盘效率均显著低于A-LB组(P0.05),而胎盘重无显著差异;出生4天的比较分析结果显示,S-DW4组的仔猪出生重、胎盘重、胎盘面积均显著低于S-SO4组和A-SO4组(P0.05),但是S-SO4组和S-DW4组的胎盘效率显著低于A-SO4组(P0.05)。(3)性状间相关性分析可知克隆猪出生时和出生4天后的存活率均与仔猪出生重、胎盘重、胎盘面积呈极显著的正相关(P0.01),且仔猪出生重与胎盘重、胎盘面积、胎盘效率均呈极显著的正相关(P0.01)。(4)胎盘组织形态学检测表明S-SO4组的胎盘发育状况接近于AI猪,但S-DW4组的胎盘组织形态有明显的异常,包括微绒毛数量不足、细胞滋养层发育异常等。脐带形态鉴定显示S-LB组的脐带异常率显著高于A-LB组(P0.05)。然而S-SO4组的脐带异常率与A-SO4组无明显差异,但显著低于S-DW4组(P0.05)。(5)m RNA表达及蛋白水平检测结果表明S-SO4组胎盘的印迹基因和非印迹基因的m RNA表达量基本上与A-SO4组无显著差异,而S-DW4组胎盘中的这些基因的m RNA表达量出现显著上调或下调,且蛋白检测分析显示S-DW4组的Cu-Zn SOD蛋白的表达异常,暗示这类胎盘容易遭受氧化应激,m RNA表达和蛋白表达失调导致胎盘的形态异常和功能受损。综上所述,大量克隆猪出生后死亡很大程度上与仔猪出生重偏低有关,胎盘的形态异常和功能缺陷是导致克隆猪宫内发育不良的主要源头。因此,改善克隆猪胎盘的发育质量可能是提高猪克隆效率及仔猪产后存活率的一种途径,出生后的克隆仔猪应得到更多的护理和重视才能减小其死亡率。
【关键词】：体细胞核移植 表观遗传修饰 印迹基因 胎盘异常
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 1 前言10-19
• 1.1 体细胞克隆技术概述10-13
• 1.1.1 体细胞克隆技术简介10
• 1.1.2 体细胞克隆技术的发展历程10-11
• 1.1.3 体细胞克隆技术的应用领域11-12
• 1.1.4 体细胞克隆技术应用面临的主要难题12-13
• 1.2 胎盘发育与体细胞克隆技术效率13-19
• 1.2.1 胎盘的类型及功能13-15
• 1.2.2 胎盘发育的调控机制15-16
• 1.2.3 胎盘相关性状与产仔数及产后动物存活率的关系16-17
• 1.2.4 克隆动物胎盘发育的研究17-19
• 1.3 本研究的目的意义及主要内容19
• 2 材料与方法19-30
• 2.1 实验材料19-22
• 2.1.1 实验样本19-20
• 2.1.2 主要试剂20
• 2.1.3 主要溶液配制20
• 2.1.4 主要仪器及设备20-21
• 2.1.5 数据分析及图片处理软件21-22
• 2.1.6 本研究的技术路线22
• 2.2 实验方法22-30
• 2.2.1 收集胎盘数据及样品22-23
• 2.2.2 胎盘组织形态学观察23-24
• 2.2.3 定量PCR检测24-27
• 2.2.4 胎盘组织Western Blot检测27-30
• 3 结果与分析30-42
• 3.1 克隆猪与人工授精猪出生时及出生4天后存活率的比较30
• 3.2 克隆猪与人工授精猪脐带表型的比较30-32
• 3.3 克隆猪与人工授精猪胎盘相关性状的比较32-33
• 3.4 克隆猪出生时和出生4天的存活率与出生重、胎盘性状的相关性分析33-35
• 3.5 克隆猪与人工授精猪的胎盘组织形态比较35-36
• 3.6 克隆猪与人工授精猪胎盘中印迹基因和非印迹基因表达比较36-42
• 3.6.1 印迹基因的表达36-37
• 3.6.2 血管生成相关基因的表达37-38
• 3.6.3 营养转运相关基因的表达38-39
• 3.6.4 细胞凋亡相关基因的表达39-40
• 3.6.5 氧化应激相关基因的表达40-42
• 4 讨论42-47
• 4.1 胎盘发育异常与克隆猪出生后存活率的关系42-45
• 4.2 改善克隆猪胎盘发育效率可能的方法45-47
• 4.2.1 利用四倍体补偿的技术替换克隆胚胎的滋养层干细胞45-46
• 4.2.2 调控代孕母猪的营养水平46-47
• 5 结论47-49
• 致谢49-50
• 参考文献50-58
• 附录 攻读硕士学位期间发表学术论文58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：436444