龙胜凤鸡中一株A亚群禽白血病病毒的基因组分析及其对SPF鸡的致病性

发布时间：2017-06-09 21:26

  本文关键词：龙胜凤鸡中一株A亚群禽白血病病毒的基因组分析及其对SPF鸡的致病性，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：禽白血病病毒(ALV)被发现已有一百多年,是最早发现并深入研究的病毒之一。它也是第一个被证实可诱发肿瘤的病毒,该发现获得1996年诺贝尔生理或医学奖。根据ALV细胞受体的特异性和病毒基因组中囊膜蛋白基因将其划分为A-J等十个亚群,并由本实验室在我国地方品系中鉴定到一个暂名为K的新亚群。ALV-J在各种亚群中流行最为广泛,致病性最强,给我国养殖业的发展造成了严重影响。但流行病学调查同时表明,感染禽白血病的鸡群不单单是由ALV-J引起的,也有一些感染鸡群是由ALV-A、B造成的。本研究对于从我国保种的地方品系基因库中分离鉴定到一株A亚群ALV(ALV-A),在完成其全基因分析基础上对其致病性开展了系统研究,这有助于了解我国地方品系鸡群中ALV-A的分子演变规律及其致病性,为我国地方品系中ALV净化提供参考依据。1、龙胜凤鸡群中ALV-A的分离鉴定及其序列分析为了解中国地方品系鸡中ALV的基因组序列特征及变异情况,本研究通过接种DF-1细胞、间接免疫荧光实验(IFA)和聚合酶链式反应(PCR)等方法,从我国特有地方品系龙胜凤鸡某保种鸡群种蛋中分离到一株ALV-A,命名为SDAU14A1。通过相互直接重叠的引物对不同基因区域进行了扩增和克隆测序,通过拼接获得了其全基因组。将该序列与不同参考毒株进行序列对比,结果显示SDAU14A1与日本矮脚鸡分离株Tyms_90全基因组同源性最高,其U3区同源性达到100%,而与其它中国地方品系鸡分离株同源性较低,暗示该毒株可能代表东亚地区地方品系鸡的某种特有毒株类型。该研究展示出我国地方品系鸡感染ALV的多样性,提示我们有必要实施严格的监控和净化措施,推动我国地方品系鸡中ALV的净化。2、ALV-A分离毒株对SPF鸡的致病性研究本实验选择卵黄囊接种和1日龄腹腔接种两种攻毒方式系统研究了SDAU14A1对SPF鸡的致病作用,并同时设置了横向传播组和空白对照组观察其横向传播能力。在1w时每只鸡分别接种0.1m L NDV和AIV-H9灭活疫苗,并于免疫后3w、4w、5w采血,分离血清后以HI试验检测针对NDV和AIV-H9抗体效价。第7w时,各组随机选取和剖杀6只鸡称其体重以及法氏囊、胸腺和脾脏的重量,计算免疫器官指数(免疫器官重量/体重)。对自然死亡的鸡剖检并观察,发生肿瘤的鸡将其肿瘤组织制备切片,HE染色后进行病理组织学观察。试验结果显示,相对于空白对照组,病毒感染组能够引起更为显著的生长迟缓和免疫抑制(p0.05),免疫抑制主要体现在攻毒实验组的胸腺指数和法氏囊指数显著降低以及NDV和AIV-H9疫苗的抗体水平显著降低(p0.05)。该毒株还可诱发淋巴细胞肿瘤并具有较强的水平传播能力。感染组与空白对照组之间相比差异极显著,但是两种接种方式感染鸡后免疫器官指数差异不显著。
【关键词】：地方品系鸡 ALV-A 全基因组分析 致病性
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 符号说明4-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-14
• 1 前言14-32
• 1.1 禽白血病的研究进展14-22
• 1.1.1 禽白血病的历史与分布14-16
• 1.1.2 禽白血病临床特征和病理变化16-18
• 1.1.2.1 临床特征16
• 1.1.2.2 病理变化16-18
• 1.1.3 禽白血病流行病学的特征变化18-20
• 1.1.3.1 感染特性18-19
• 1.1.3.2 传播特征19-20
• 1.1.4 禽白血病的检测和诊断20-21
• 1.1.5 禽白血病的防制研究现状21-22
• 1.2 禽白血病病毒的研究进展22-31
• 1.2.1 禽白血病病毒的结构与增殖23-24
• 1.2.2 禽白血病病毒的分型24-25
• 1.2.3 禽白血病病毒的基因组结构及其功能25-29
• 1.2.4 禽白血病病毒的致肿瘤机制29-30
• 1.2.5 禽白血病病毒引起的免疫抑制30-31
• 1.3 本研究的目的及意义31-32
• 2 材料方法32-44
• 2.1 材料32-34
• 2.1.1 病料及毒株来源32
• 2.1.2 细胞32
• 2.1.3 试验动物与SPF饲养设施32-33
• 2.1.4 用于同源性比较的各亚群参考株33
• 2.1.5 主要仪器和试剂33-34
• 2.1.6 试剂的配制34
• 2.2 方法34-44
• 2.2.1 病毒分离34-35
• 2.2.2 病毒的鉴定35-37
• 2.2.2.1 免疫荧光的鉴定35-36
• 2.2.2.2 斑点分子杂交36-37
• 2.2.3 病毒扩增定量37
• 2.2.4 SDAU14A1株env基因的扩增、克隆和测序37-40
• 2.2.4.1 ALV前病毒DNA的制备37-38
• 2.2.4.2 扩增ALV env基因的引物设计38
• 2.2.4.3 分离病毒env基因的扩增、克隆与测序38-40
• 2.2.4.4 分离株gp85氨基酸序列与ALV各亚群参考株的同源性比较40
• 2.2.5 前病毒全基因组DNA的克隆测序及序列分析40-41
• 2.2.6 分离毒株对SPF鸡的致病性41-44
• 2.2.6.1 实验分组41
• 2.2.6.2 病毒血症的动态检测41
• 2.2.6.3 体重及免疫器官指数的测定41
• 2.2.6.4 NDV和AIV-H9灭活疫苗的免疫和抗体水平的测定41-42
• 2.2.6.5 血凝抑制试验测定NDV和AIV-H9抗体滴度42-44
• 3 结果44-54
• 3.1 ALV的分离鉴定与定量44-45
• 3.2 分离毒株env基因的序列分析与亚群确定45-46
• 3.3 SDAU14A1株前病毒DNA的扩增和序列分析46-48
• 3.4 不同感染方式下SPF鸡病毒血症动态变化48-49
• 3.5 SDAU14A1感染对SPF鸡体重的影响49-50
• 3.6 SDAU14A1感染对鸡免疫功能的影响50-52
• 3.7 感染鸡的发病与肿瘤情况52-54
• 4 讨论54-56
• 5 结论56-57
• 参考文献57-66
• 致谢66-67
• 硕士期间发表的论文67

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 John.A.T.Young,李华;禽白血病病毒-受体作用[J];国外畜牧科技;1999年04期

2 胡晓苗;张丹俊;侯宏艳;戴银;赵瑞宏;潘孝成;周学利;沈学怀;朱传明;;活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法探讨[J];安徽农业科学;2013年26期

3 秦爱建,刘岳龙,周绮雯,黄维嘉;J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果[J];中国预防兽医学报;2001年03期

4 杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J];中国病毒学;2003年05期

5 陈晨,曹红,金英杰,雷霆,庞平,刘海霞,宋铁彬,陈福勇;禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化[J];中国预防兽医学报;2005年06期

6 叶建强;秦爱建;邵红霞;金文杰;刘岳龙;;J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立[J];中国兽医学报;2006年03期

7 冯小宇;徐镔蕊;Lucy F.Lee;Maoxiang Li;;蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离与初步鉴定[J];中国兽医杂志;2008年01期

8 李佳桃;崔宝玉;岳华;李明义;汤承;;荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立及应用[J];中国动物检疫;2008年09期

9 柴家前;王贵强;孙淑红;郭慧君;崔治中;;J亚群禽白血病病毒分子流行病学研究进展[J];山东畜牧兽医;2009年01期

10 杨守锋;邢红方;彭远义;;J亚型禽白血病病毒病原学及诊断方法研究进展[J];畜禽业;2009年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杨玉莹;叶建强;赵振华;秦爱建;顾玉芳;;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年

2 王真真;蔡黎明;徐晴晴;王桂花;成子强;;外源体在禽白血病病毒诱导免疫抑制中的作用[A];2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会论文集[C];2012年

3 李佳桃;汤承;岳华;;检测禽白血病病毒的荧光定量RT-PCR方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集[C];2007年

4 张太翔;凌宗帅;史玉颖;高小博;田国宁;张金玲;韩亮;张丽萍;;实时荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立与应用[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）[C];2009年

5 叶建强;秦爱建;邵红霞;金文杰;刘岳龙;;J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年

6 秦爱建;刘岳龙;周绮雯;黄维嘉;;J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年

7 廖亚琳;廖明;曹伟胜;;禽白血病病毒受体研究进展[A];第三届（2012）中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2012年

8 孙淼;吴艳;郭振华;曾凡桂;曹红;郑世军;陈福勇;;J亚型禽白血病病毒分子流行病学调查及进化分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

9 王彦军;孙淼;曹红;陈福勇;;禽白血病病毒自然感染及抗体变化动态规律[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

10 顾小雪;韩雪;蔡林;张硕;李晓霞;汪葆s，

本文编号：436665