咪达唑仑对钙离子通路的影响及临床应用实验

发布时间：2017-06-09 22:02

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【摘要】：目的:本实验的目的是观察注射不同剂量的咪达唑仑对Ca2+—CaM—Ca MKII通路的影响,研究通路内离子和相关转导因子含量的变化。进一步探究咪达唑仑对大脑神经中枢的抑制作用,以及对学习记忆功能的影响,为日后临床研究上合理利用咪达唑仑提供指导和依据。方法:首先准备wistar大鼠72只,从中任意选取24只,并将它们按照不同咪达唑仑剂量分成四组进行水迷宫试验:按照各自要求给药后,老鼠清醒即刻进行水迷宫定位航行试验,连续5天,在第六天的同一时间,再次给药,清醒即刻进行大鼠的空间探索试验。将剩余48只大鼠随机分为4组,在腹腔注射不同剂量咪达唑仑后的不同时间点断头处死大鼠,分离海马组织,用RT-PCR方法检测CaMK和Ca MKⅡmRNA表达,用比色法检测Ca2+离子的表达。结果:1.水迷宫结果显示:被注射入咪达唑仑的三组实验大鼠,在定位航行试验中和生理盐水组相比,表现出更长的逃避潜伏期。与此同时在空间探索实验中,第三象限停留时间比率降低,穿越实验平台结果也呈现减小趋势,并且给药剂量越大,大鼠的平均逃避潜伏期越长,穿越平台次数和第三象限停留时间比率均越低。各组统计学差异明显(P0.05)。2.用RT-PCR方法检测大鼠海马中Ca M和CaMKII mRNA表达的结果显示,咪达唑仑剂量依赖式的抑制了Ca M和CaMKII mRNA的表达,剂量越大,抑制越明显。各组统计学差异明显(P0.05)。3.比色法测定的Ca2+浓度也随着给药剂量的升高而降低。各组统计学差异明显(P0.05)。结论:行为学与生物学检测结果相一致,推测咪达唑仑可能通过Ca2+—Ca M—CaMKII通路的作用机制来导致大鼠学习记忆的短期损伤。
【关键词】：咪达唑仑 Ca2+—Ca M—Ca MKII信号通路 学习记忆 海马
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.7
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-10
• 1 引言10-20
• 1.1 咪达唑仑概述10-11
• 1.2 咪达唑仑的临床麻醉概述11-14
• 1.2.1 咪达唑仑麻醉前用药应用概述11
• 1.2.2 咪达唑仑全身麻醉诱导和维持应用概述11-12
• 1.2.3 咪达唑仑全凭静脉麻醉(TIVA)应用概述12
• 1.2.4 咪达唑仑腰麻、硬膜外麻醉应用概述12-14
• 1.3 咪达唑仑在癫痫持续状态的应用概述14
• 1.4 学习记忆与海马14-18
• 1.4.1 学习记忆14-15
• 1.4.2 海马15-16
• 1.4.3 与学习记忆相关的行为学检测16-18
• 1.5 Ca~(2+)-Ca M-CaMKII通路18-19
• 1.5.1 Ca~(2+)-CaM信号转导通路18-19
• 1.5.2 CaMKⅡ的生物学特性及与学习记忆的关系19
• 1.6 实验目的与意义19-20
• 2 材料与方法20-27
• 2.1 实验材料20-21
• 2.1.1 实验动物20
• 2.1.2 主要试剂20
• 2.1.3 主要仪器和设备20-21
• 2.2 实验方法21-27
• 2.2.1 动物分组21-22
• 2.2.2 基因克隆和实时荧光PCR22-24
• 2.2.3 比色法对钙离子浓度的测量24-26
• 2.2.4 水迷宫行为学实验26-27
• 3 结果27-36
• 3.1 基因克隆结果和实时荧光PCR27-32
• 3.1.1 目的基因片段PCR扩增结果27
• 3.1.2 对CaM和CaMKⅡ的实时荧光PCR方法的建立27-29
• 3.1.3 不同浓度的咪达唑仑对CaM、CaMKⅡ的mRNA表达量的影响29-32
• 3.2 钙离子浓度32-33
• 3.2.1 标准曲线32
• 3.2.2 钙离子浓度分析32-33
• 3.3 水迷宫结果33-36
• 3.3.1 不同浓度咪达唑仑对空间学习记忆影响33-35
• 3.3.2 定位航行实验路线35-36
• 4 讨论36-39
• 4.1 确定给药剂量与采样时间的方法36-37
• 4.2 水迷宫检测方法的优缺点37
• 4.3 咪达唑仑对大鼠学习记忆的影响37-39
• 5 结论39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-45
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文45

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