鸡TAP基因变异及其与马立克氏病的相关性研究

发布时间：2017-06-27 03:09

  本文关键词：鸡TAP基因变异及其与马立克氏病的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：抗原处理相关转运体(Transporter associated with antigen processing,TAP)属于ATP结合盒式蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC)超家族。TAP在MHC-I类分子的成熟及膜表面表达中起着十分重要的作用,MHC-I分子在病毒感染的免疫应答反应中和通过与抗原肽结合并将其递呈到细胞毒性T淋巴细胞(CTL)来转化细胞中发挥重要作用。当TAP功能障碍或表达下降时都将导致肿瘤抗原不能被有效地转运,从而导致肿瘤逃避免疫监视。TAP基因的功能在人类和哺乳动物疾病中研究较多,与禽类疾病的相关性研究较少。马立克氏病(MD)是由疱疹病毒2或MD病毒(MDV)引起的鸡的一种毁灭性的肿瘤性病毒病,对世界各地的家禽业均造成过重大经济损失,而且MDV的毒力在不断地增加,通过疫苗途径不能有效地预防和控制,需要通过基因手段来检测、有针对性地治疗和预防。本研究的目的是检测济宁百日鸡、寿光鸡、SPF鸡中TAP基因的变异及其与马立克氏病的相关性。本研究首先运用分子遗传标记技术,检测了济宁百日鸡、寿光鸡、SPF鸡的TAP基因的多态性,统计分析了不同基因型与MD的相关性,结果发现TAP1-3、TAP1-4、TAP2-2和TAP2-3引物扩增产物有多态基因型。进一步对三个品种的鸡群进行了实验室攻毒试验,统计分析了TAP特异性片段上的变异位点,继而分别在济宁百日鸡、寿光鸡、SPF鸡的TAP1特异性片段上依次发现了18个、14个、16个变异位点,在济宁百日鸡、寿光鸡、SPF鸡的TAP2特异性片段上分别发现了12个、14个、13个变异位点。对变异位点进行统计分析,发现TAP1有4个变异位点可以导致氨基酸的改变,TAP2上有7个变异位点可以导致氨基酸的改变。对TAP的变异位点与马立克氏病的相关性进行研究,发现有24个变异位点与马立克氏病有关,其中JB1323、JB1050、JB1148、SG1303、SPF1082、SPF1196位点与马立克氏病的易感性有显著相关(P0.05)。进一步对6个变异位点的不同基因型进行遗传模式分析,发现JB1323和JB1050是马立克氏病的易感高风险突变位点,JB1323位点的(C→T)可引起氨基酸的改变,由丙氨酸转变为缬氨酸;JB1050位点(G→T)使得丙氨酸变为丝氨酸。为了进一步了解TAP表达量与MD的相关性,采用荧光定量PCR技术研究了TAP基因的变异位点JB1323和JB1050的不同基因型所在的个体中TAP的表达量,结果发现,TAP的表达量在JB1323位点处易感的纯合体中比野生纯合体的低,在JB1050位点处杂合体中比纯合体的低,但差异不显著(P0.05)。感染马立克氏病病毒后TAP1的表达量在心脏、肝脏均显著升高,TAP1在脾脏中表达量显著下降,在肾脏、肺脏中TAP1表达量变化不显著。对TAP2表达量的检测发现,在脾脏中,TAP2在抗病组中相对表达量显著下降。进一步对鸡脾脏中TAP表达量进行了分析,发现感染马立克氏病病毒后TAP在脾脏中表达量有先增加、后下降的变化规律,说明TAP表达量升高可以作为马立克氏病感染初期的一个标志性指标,用于检测马立克氏病。
【关键词】：MD TAP1 TAP2 鸡 变异位点 攻毒实验
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 英文缩略词4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-23
• 1.1 MHC的研究进展11-13
• 1.1.1 MHC的结构与功能11-12
• 1.1.2 MHC与疾病相关性的研究进展12-13
• 1.2 抗原处理相关转运体的研究进展13-17
• 1.2.1 TAP基因结构13-15
• 1.2.2 TAP的转运机制15
• 1.2.3 TAP基因的多态性研究进展15-17
• 1.2.4 TAP表达量与疾病相关性的研究进展17
• 1.3 马立克氏病的研究进展17-20
• 1.3.1 MDV的研究进展18-19
• 1.3.2 马立克氏病的病理学研究进展19-20
• 1.4 山东地方鸡种质资源20-21
• 1.4.1 济宁百日鸡种质特性研究现状20
• 1.4.2 寿光鸡种质特性研究现状20-21
• 1.5 分子遗传标记技术21-22
• 1.5.1 单链构象多态性技术（SSCP）21
• 1.5.2 单核苷酸多态性（SNP）21-22
• 1.6 本研究的目的与意义22-23
• 2 材料与方法23-38
• 2.1 试验材料23-26
• 2.1.1 试验动物和毒株23
• 2.1.2 试验试剂与来源23-24
• 2.1.3 主要仪器与来源24
• 2.1.4 数据库和软件24
• 2.1.5 实验所用试剂的配置24-26
• 2.2 试验方法26-38
• 2.2.1 三种鸡的TAP基因多态性分析26-31
• 2.2.2 TAP1和TAP2特异性片段与MD的相关性分析31-35
• 2.2.3 鸡TAP表达量与马立克氏病的相关性分析35-38
• 3 结果与分析38-72
• 3.1 三种鸡的TAP基因多态性检测结果38-40
• 3.1.1 三种鸡的DNA提取和质量检测结果38
• 3.1.2 三种鸡的TAP1和TAP2基因的PCR结果38-39
• 3.1.3 三种鸡TAP1和TAP2多态性分析39-40
• 3.2 三种鸡TAP1和TAP2的特异性片段与马立克氏病的相关分析40-66
• 3.2.1 三种鸡TAP1和TAP2的特异性片段的PCR扩增40-41
• 3.2.2 三种鸡TAP1和TAP2特异性片段的变异位点克隆测序结果41-43
• 3.2.3 三种鸡的TAP基因的多态位点的遗传分析43-52
• 3.2.4 变异位点对应的氨基酸比对结果52
• 3.2.5 导致氨基酸变化的变异位点导致的蛋白质变化分析52-54
• 3.2.6 所有变异位点的等位基因频率的χ2 检验54-61
• 3.2.7 变异位点与马立克氏病抗性的相关性分析61-66
• 3.3 TAP的表达量分析66-72
• 3.3.1 济宁百日鸡的总RNA提取结果66
• 3.3.2 持家基因与目的基因的PCR结果检测66-67
• 3.3.3 TAP1、TAP2和β-actin的扩增曲线、标准曲线和熔解曲线67-69
• 3.3.4 TAP在济宁百日鸡内脏组织里的相对表达量69-71
• 3.3.5 TAP在1323位点、1050 位点不同基因型中的表达量71-72
• 4 讨论72-77
• 4.1 三种鸡TAP1和TAP2基因的多态性72-74
• 4.2 TAP多态性与马立克氏病的相关性74-75
• 4.3 TAP表达量与马立克氏病的相关性75-77
• 5 结论77-78
• 参考文献78-89
• 致谢89

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  本文关键词：鸡TAP基因变异及其与马立克氏病的相关性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

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