泰安某猪场猪瘟病毒的检测及疫苗免疫效果评价

发布时间：2017-06-27 14:22

  本文关键词：泰安某猪场猪瘟病毒的检测及疫苗免疫效果评价，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：猪瘟是由黄病毒科的猪瘟病毒感染引起的猪的一种热性、高度接触传染性疾病,该病自19世纪爆发以来,一直影响着全球的养猪业,每年给养猪业造成巨大损失。猪瘟兔化弱毒疫苗的使用,使得猪瘟在我国的流行范围及造成的损失大大降低,但近年来在常规免疫猪瘟疫苗的猪场又有猪瘟病例的爆发,发病猪群主要集中在保育阶段,病猪多表现为热性疾病的一般性症状,发病率高、死亡率也不低;母猪被感染后多表现为一过性繁殖障碍,当与其它病原微生物混合感染后,也能明显影响猪场的生产成绩。2014年11月泰安某猪场保育猪群发生以高热(40~41℃)、精神沉郁、食欲不振、四肢内侧及耳尖发绀为主要特征的急性热性传染病,且常规性治疗措施如退烧、肌注头孢噻呋钠及饮水给予电解多维和葡萄糖等对该病无明显疗效。为了明确引起此次疫情的致病病原,在流行病学调查的基础上,开展了病理解剖、组织病理学检查、分子生物学检测、病毒分离与鉴定、病毒基因扩增测序及同源性比对等试验。大体剖检及组织病理学检查结果表明病猪具有猪瘟病毒感染的特征性病变如浆液性-出血性淋巴结炎、脾脏梗死、病毒性脑炎、肠道淋巴组织坏死及固膜性肠炎等,初步显示该病可能由猪瘟病毒感染引起,并排除细菌感染的可能。分子生物学及病毒分离结果表明,送检的3份病料中仅有猪瘟病毒被检出且被分离得到(SDTA2015)。随后我们对猪瘟病毒E2基因全长进行了克隆和测序,E2基因全长为1119个碱基,编码373个氨基酸;相似性分析表明,SDTA2015与其它参考毒株的核苷酸相似性介于81.3%~97.4%之间,氨基酸相似性介于87.7%~98.1%之间。分离株与8个各基因亚型的参考毒株相比,与3.4基因亚型的TWN株相比具有最低的核苷酸(81.8%)和氨基酸相似性(88.7%)。而与2.1基因亚型的参考毒株具有更高的核苷酸(90.4%~96.2%)和氨基酸相似性(93.8%~97.6%)。其中SDTA2015与2.1d亚型参考毒株(SDQS)的相似性最高,核苷酸为96.2%,氨基酸为97.6%。另外,新分离株与2.1b亚型的同源性高于2.1a或2.1c,表明2.1b亚型和2.1d亚型具有较高的相似度,这与之前的报道一致。随后,我们将新分离株SDTA2015与27株参考序列构建了系统发育进化树,结果表明,这28条序列被分到了3个基因群(1,2,3)中,共包括8个基因亚群(1.1~1.4,2.1~2.3,3.4)。其中,2.1亚群能被进一步划分为2.1a,2.1b,2.1c及一个新被定义的2.1d基因亚群。此次分离得到的猪瘟毒株在进化树中属于2.1亚群,与传统的石门毒株(1.1)或兔化弱毒疫苗毒株(HCLV,1.1)具有较大的不同。待该场发病猪只康复且疫情消除后,猪场恢复了正常的生产和免疫,遂对该场不同阶段猪只进行采样,以判定其免疫状态并对免疫效果进行评价。自该场共采集血液样本131份,阳性样本有106份,整体阳性率为80.92%,整体猪瘟抗体水平不错。不同阶段猪群抗体阳性率在60.00%~86.67%之间,呈现出一定的差异性。其中以生产公猪的抗体阳性率最高,育肥猪的抗体阳性率最低,表明育肥后期猪瘟抗体水平下降,育肥猪对猪瘟病毒的易感性较高。此外,妊娠母猪及保育猪的猪瘟抗体阳性率均低于85.00%,说明抗体水平不是太好。总的来说,该场此次疫情确系猪瘟病毒感染引起,且致病病原属于2.1亚型中的一个新的亚型2.1d,表明2.1d亚型的猪瘟病毒已在我省广泛传播和流行,并能造成猪只急性发病和死亡。关于新分离株的毒力和致病性特征尚不明确,需要进一步试验研究。此外,抗体检测结果表明,该场在疫情扑灭后,及时调整了猪瘟疫苗的免疫程序,新的免疫程序能够使猪群获得较高水平的抗体水平,但育肥猪的抗体水平较差,如若育肥后期有间歇性猪瘟病例出现的话,应该在育肥期加强免疫一次猪瘟疫苗。
【关键词】：猪瘟 猪瘟病毒 综合诊断 基因变异 抗体
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 符号说明4-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-27
• 1.1 猪瘟概述12-13
• 1.2 猪瘟病毒病原学及其流行特点13-14
• 1.3 猪瘟病毒在全球的流行现状14-15
• 1.4 猪瘟病毒的分子特征15-20
• 1.4.1 猪瘟病毒的 5’-端非编码区16
• 1.4.2 猪瘟病毒的 3’-端非编码区16-17
• 1.4.3 Npro蛋白17
• 1.4.4 其他非结构蛋白17-18
• 1.4.5 结构蛋白18-19
• 1.4.5.1 核衣壳蛋白18
• 1.4.5.2 Erns糖蛋白18-19
• 1.4.5.3 E1糖蛋白19
• 1.4.6 囊膜糖蛋白E219-20
• 1.5 猪瘟病毒致病机制与特点20-23
• 1.5.1 致病机制20-21
• 1.5.2 免疫抑制21-22
• 1.5.2.1 猪瘟病毒感染引起免疫器官损伤21
• 1.5.2.2 猪瘟病毒感染引起淋巴细胞数量下降21-22
• 1.5.2.3 猪瘟病毒抑制Ⅰ型干扰素的产生22
• 1.5.2.4 猪瘟病毒感染导致树突状细胞无应答22
• 1.5.3 持续感染22-23
• 1.6 猪瘟的综合诊断23-25
• 1.6.1 病理学诊断23
• 1.6.2 血清学诊断23-24
• 1.6.3 分子生物学诊断24-25
• 1.7 猪瘟的防控与净化25-26
• 1.7.1 建立健全生物安全措施25
• 1.7.2 做好免疫及监测25-26
• 1.7.3 净化种猪群26
• 1.8 研究目的和意义26-27
• 2 材料与方法27-38
• 2.1 材料27-31
• 2.1.1 试验动物27
• 2.1.2 样品采集27-28
• 2.1.3 试剂与耗材28
• 2.1.4 主要仪器设备与器材28-29
• 2.1.5 常用溶液配制29-30
• 2.1.6 引物设计与合成30
• 2.1.7 细胞30
• 2.1.8 生物信息学分析软件30-31
• 2.2 方法31-38
• 2.2.1 病死猪的组织病理学检查31-33
• 2.2.1.1 玻片的处理31
• 2.2.1.2 组织切片的制备31-32
• 2.2.1.3 组织切片的苏木素-伊红（H&E）染色32-33
• 2.2.2 病料中病毒感染状况检测33-34
• 2.2.2.1 病料研磨与核酸提取33-34
• 2.2.2.2 病料样品的PCR/RT-PCR检测34
• 2.2.3 猪瘟病毒分离34-35
• 2.2.4 猪瘟病毒E2基因扩增，阳性扩增片段的胶回收、连接、转化与测序35
• 2.2.5 猪瘟病毒E2基因序列及推导氨基酸序列分析35-36
• 2.2.6 血清中抗猪瘟病毒抗体水平的检测36-38
• 3 结果38-45
• 3.1 病死猪的眼观和组织学病变38-40
• 3.2 疑似病料的病原检测结果40-41
• 3.3 病毒分离与鉴定41
• 3.4 E2基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分析41-43
• 3.5 E2基因与各参考毒株差异性分析43-44
• 3.6 猪瘟抗体水平44-45
• 4 讨论45-46
• 5 结论46-47
• 附录47-48
• 参考文献48-54
• 致谢54

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