一起猪血凝性脑脊髓炎的诊断

发布时间：2017-07-02 02:02

  本文关键词：一起猪血凝性脑脊髓炎的诊断，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：猪血凝性脑脊髓炎(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis,PHE)是由猪血凝性脑脊髓炎病毒(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)引起猪的一种高度接触性的传染病。PHEV主要侵染猪的中枢神经系统,其引发仔猪的死亡率达20%~100%,而成年猪则很少发病。根据该病的临床表现、传播途径、流行特点及病理组织学变化等,可以将其分为两大类型,一种是以呕吐、衰竭为主要特征的呕吐消耗型(Vomiting and wasting disease,VWD),另一种是以出现神经症状为主的脑脊髓炎型。前者多呈急性暴发,是最初被发现的PHE疾病类型。血清学调查发现,该病在中国、加拿大、英国、北爱尔兰、日本及美国等多个国家和地区均有发生和流行。1986年,我国首次报道PHEV感染的发生,之后多个省份均有该病的发生和流行。近年来,东北地区频繁暴发该病,血清学调查发现吉林省和辽宁省猪群中存在较高PHEV阳性感染率。最近几年,猪血凝性脑脊髓炎多次在规模化的种猪场出现,给当地养猪业造成较大的经济损失。2015年8月初,吉林省长春市北四环玉泉养殖场饲养的母猪陆续开始产仔,母猪未见流产或产弱胎、死胎现象。新生仔猪十分活泼,未见异常。但多数仔猪在10日龄左右开始发病(个别仔猪于2日龄发病),出现抽搐、后肢麻痹、不能站立等特点,部分表现呕吐、腹泻等临床症状;有的断奶仔猪也出现类似症状。截止到8月中旬,先后由10头母猪生产的128头仔猪全部死亡(死亡率100%)。为了进一步对疾病做出诊断,本研究分别从病理学和病原学角度进行了分析和研究。1病理学诊断对送检病死猪进行大体病理剖检,内脏组织器官未见有明显的病变,但可见脑组织淤血、水肿,胃肠内充满大量内容物。采集病猪的脾脏、肾脏、脑、脊髓等多个组织,制作石蜡切片并进行H.E.染色,镜检可见,肝脏发生轻度的颗粒变性,肝小叶间门管区静脉严重淤血;脾脏脾小体淋巴细胞结构疏松,少量淋巴细胞胞核浓缩,动脉周围淋巴鞘显著增厚;脊髓灰质胶质细胞围绕在神经元周围形成明显的“卫星现象”;脑组织可见有典型的噬神经现象,呈现非化脓性脑炎的病理变化;部分肾小管上皮细胞变性、坏死。2病原学诊断利用针对PHEV的特异性引物对剖检病猪的各组织器官进行RT-PCR扩增,扩增出与目的片段大小一致的特异性条带。为了排除能引起相似临床症状的病原感染的可能,本研究分别利用针对猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、丁型冠状病毒(PDCo V)、猪轮状病毒(Po RV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒的特异性引物进行类症鉴别诊断。结果显示,仅有针对PHEV引物的RT-PCR扩增结果为阳性,其他病毒的扩增结果均为阴性。细菌学检测结果也为阴性,排除了细菌混合感染的可能性。之后,对PHEV阳性病料组织进行研磨处理,研磨上清液经感作处理后接种正常PK-15细胞,进行病毒的分离,接种细胞在盲传6代后出现变圆、融合、聚堆等明显的CPE。电镜负染观察可见,病毒粒子具有冠状病毒典型的“帽子”结构。随后将分离的病毒接种到18-20日龄的Balb/c小鼠体内,并设置阴性和阳性对照,结果发现试验组小鼠接毒后出现明显的神经症状,一周后死亡,死亡小鼠的脑组织病理学观察发现出现“噬神经”现象,死亡小鼠的脑和脾脏RT-PCR检测结果均为阳性。综合上述结果,从病原学角度证实该起病例为PHEV感染所致。之后,在分离获得PHEV毒株的基础上,对其M、N基因序列进行扩增、克隆及测序,并进行同源性分析和系统遗传进化树分析,遗传进化分析结果显示,该毒株与本实验室在2014年分离获得的吉林PHEV-JT06病毒株和加拿大在2002年所分离的PHEV-Canada病毒株的亲缘关系最近。该研究不仅为针对PHEV的临床快速诊断提供重要的技术手段,而且将为针对PHEV疫苗的研制提供重要的物质基础,并为进一步制定针对PHEV的切实有效的防控措施提供一定的理论依据。
【关键词】：猪血凝性脑脊髓炎 诊断 分离鉴定 遗传进化树分析
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-13
• 前言13-15
• 第1章 文献综述15-29
• 1.1 病原学15-17
• 1.2 流行病学17-19
• 1.3 临床症状19-20
• 1.4 病理变化20-21
• 1.5 致病机理21
• 1.6 诊断21-28
• 1.7 防制28-29
• 第2章 一起猪血凝性脑脊髓炎的诊断29-46
• 2.1 材料与方法29-37
• 2.2 结果37-43
• 2.3 讨论43-45
• 2.4 小结45-46
• 第3章 猪血凝性脑脊髓炎病毒的病原分离鉴定及M、N基因的遗传进化分析46-65
• 3.1 材料与方法46-53
• 3.2 结果53-62
• 3.3 讨论62-64
• 3.4 小结64-65
• 结论65-66
• 参考文献66-75
• 导师简介75-76
• 个人简介76-77
• 致谢77

【参考文献】

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本文编号：508158