转录激活因子样效应物核酸酶介导的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳铁蛋白基因定点整合

发布时间：2017-07-02 12:28

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【摘要】：为了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点整合人乳铁蛋白(hLF)基因。首先针对山羊BLG第3外显子识别位点设计了1对特异性TALEN-3-L/R质粒对;同时,构建了含有1个HSV-TK负筛选基因的hLF基因打靶载体BLC14-TK。TALENs质粒对转染山羊胎儿成纤维细胞,2μg/m L嘌呤霉素筛选3 d,PCR扩增产物测序来验证其切割DNA活性。打靶载体BLC14-TK与TALEN-3-L/R质粒对共转染山羊胎儿成纤维细胞,经700μg/m L G418和2μg/m L GCV共筛选药物抗性细胞株;通过整合检测和同源重组检测来筛选hLF基因打靶细胞株;BLG~ /hLF~+打靶细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植。结果为:TALEN-3-L/R致突变率为25%-30%;获得BLG~ /hLF~+打靶细胞6株;共制作重构胚胎335枚,移植受体山羊23只,B超检测到30-35 d的妊娠受体9只(妊娠率39.1%),其中1只50日龄克隆胎儿验证为BLG~ /hLF~+基因型。以上结果表明获得BLG基因座定点整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,为培育羊乳中含低致敏原和富含hLF的山羊新品系奠定了基础。
【作者单位】： 扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【关键词】： TALENs 人乳铁蛋白 BLG 基因打靶 体细胞核移植
【基金】：国家转基因生物新品种培育重大专项(No.2011ZX08008-004) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 扬州大学研究生科研创新计划项目(No.CXLX-1435)资助~~
【分类号】：Q78;S827
【正文快照】： 随着人类生活品质的提高,对乳品质的要求也越来越高[1]。由于山羊乳更接近于人乳,成为牛乳过敏症患者最理想的替代乳品[2]。β-乳球蛋白(BLG) 是山羊乳的主要过敏源之一,山羊乳可通过转基因技术进行人乳化改造,降低乳汁中过敏源和增加人乳铁蛋白( H u m a n lactoferrin,h LF)

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本文编号：509948