5株猫杯状病毒致病性及免疫原性的比较研究

发布时间：2017-07-02 14:20

  本文关键词：5株猫杯状病毒致病性及免疫原性的比较研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是杯状病毒科(Caliciviridae)杯状病毒属(Vesivirus)的重要成员之一,可引起猫及猫科动物呼吸道传染病,其主要临床症状表现为鼻炎、结膜炎、急性口腔溃疡、肺炎、慢性胃炎和跛行等。目前的研究发现FCV只有一个血清型,且在毒力、抗原性和遗传性方面变化很大。自1957年Fastier首次分离鉴定FCV以来,在欧洲、美洲、亚洲均发现FCV,且已呈世界性分布。猫被认为是该病毒的自然宿主,几乎所有猫科动物对FCV易感,其中以猫和猎豹最为易感,同时也有狗感染的报道。猫杯状病毒仅有一个血清型,但具有丰富的抗原多样性,遗传变异性也很强,这成为猫杯状病毒感染准确诊断和有效防制的一大难题。近年来,由于FCV高度的变异性产生的强毒株可引起严重、急性、致死性全身性疾病(Virulent Systemic Disease,VSD),对猫群及其他猫科动物的健康构成严重威胁。FCV的感染可以被免疫反应所抑制。通过人工免疫和使动物产生母源抗体都可以一定程度减轻或消除FCV感染后的临床症状。因此,疫苗接种仍是预防该病的主要措施。FCV疫苗己应用多年,主要为灭活苗和减毒活疫苗,且以联苗和多价苗较为常见。传统疫苗的使用有效地降低了该病的发病率及动物排毒情况。由于FCV丰富的抗原多样性和遗传变异性,现有的商品化疫苗并不能提供完全保护。国内针对FCV的病原学、形态学和分子生物学等方面的研究已取得很大进展,但对FCV不同分离株致病性和免疫原性方面的研究还不够深入。对FCV致病性和免疫原性的研究有助于毒种的筛选及新型疫苗的研发,可为该病的防制奠定基础。本实验将6~11周龄健康非免疫猫分为实验组和对照组,其中,实验组猫分别人工接种实验室现有的5株已知不同地域的FCV分离株CH-SH株、CH-JL-1株、CH-JL-2株、CH-JL-3株、CH-JL-4株细胞病毒液,对照组接种等量细胞培养液。接种前后分别测定各组猫的体温、体重,观察发病情况及临床症状,按照欧洲药典对症状的相关规定进行计分。于感染后14天麻醉处死,观察组织器官的病理变化并制备病理组织切片。结果显示,实验组猫感染FCV后总发病率为100%;SH、JL-1、JL-2;JL-2、JL-3、JL-4组临床症状平均得分分别为8、4、9;10、5、8,对照组得分为1;病理解剖观察发现,猫感染FCV后,以鼻、眼分泌物增加,口腔溃疡为特征,消化道病变较轻微,肺部出现不同程度的变性、出血,呈现明显的病理性“肉样变”;病理组织学观察发现,肺脏有数量不等的肺泡上皮细胞和巨噬细胞脱落,伴随少量纤维蛋白渗出和弥漫性肺泡损伤。由此说明,FCV各分离株均有一定的致病性,其中以JL-2株的毒力最强,JL-4株次之。将甲醛灭活后的FCV各分离株与弗氏佐剂混合,分别制备油乳剂疫苗。将健康非免疫猫随机分为免疫组和对照组。免疫组皮下接种1.5mL相应灭活疫苗,对照组皮下接种等量F81细胞培养液。于接种后不同时间点采集猫血清,应用ELISA方法检测免疫猫IgG抗体、IL-2、IL-4和IFN-γ等细胞因子含量,评价各株诱导的体液免疫水平;通过淋巴细胞增殖实验,评价各株诱导的细胞免疫水平。结果表明,各株均能诱导试验猫产生免疫应答,其诱导体液免疫顺序依次为:JL-2JL-1JL-4JL-3SH,诱导细胞免疫顺序依次为:JL-4JL-2JL-1SHJL-3,确定各分离株免疫原性顺序为:JL-2JL-4JL-1JL-3SH。
【关键词】：猫杯状病毒 分离株 疫苗 致病性 免疫原性
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-10
• 第一篇 文献综述10-19
• 1 病原学10-13
• 2 流行病学13-14
• 3 临床症状与病理剖检特点14
• 4 诊断14-16
• 5 免疫防制16-17
• 6 研究目的和意义17-19
• 第二篇 研究内容19-43
• 第一章 5株猫杯状病毒致病性的比较19-33
• 1 材料19-22
• 2 方法22-24
• 2.1 FCV阴性猫的筛选22
• 2.2 目的基因的PCR扩增22-23
• 2.3 FCV人工接种试验23-24
• 2.4 病理组织切片观察24
• 2.5 接种猫咽拭子检测24
• 2.6 数据处理24
• 3 结果24-31
• 3.1 FCV检测及分组结果24-26
• 3.2 FCV人工接种试验结果26-31
• 4 讨论31-32
• 4.1 FCV的致病特点31-32
• 4.2 试验中遇到的问题32
• 5 小结32-33
• 第二章 5株猫杯状病毒免疫原性的比较33-43
• 1 材料33-35
• 2 方法35-36
• 2.1 FCV阴性猫的筛选35
• 2.2 油乳剂灭活疫苗的制备35
• 2.3 动物接种35
• 2.4 IgG抗体测定35
• 2.5 IL-2、IL-4、IFN-γ 含量测定35
• 2.6 T淋巴细胞增殖测定35-36
• 2.7 中和试验36
• 2.8 数据处理36
• 3 结果36-40
• 3.1 FCV检测及分组结果36
• 3.2 免疫前后IgG含量变化36-37
• 3.3 免疫前后IL-2 含量变化37-38
• 3.4 免疫前后IL-4 含量变化38
• 3.5 免疫前后IFN-γ 含量变化38-39
• 3.6 免疫前后淋巴细胞增殖变化39-40
• 3.7 中和试验结果40
• 4 讨论40-42
• 4.1 IL-2、IL-4、IFN-γ 的生物学特性40-41
• 4.2 细胞因子的分泌特点41
• 4.3 5 株FCV免疫原性的比较41-42
• 5 小结42-43
• 结论43-44
• 参考文献44-49
• 作者简介49-50
• 致谢50

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本文编号：510275