大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达

发布时间：2017-07-14 11:01

  本文关键词：大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达

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【摘要】：为构建大约克猪SLA-1胞外区的原核表达载体及表达目的蛋白,试验设计1对引物,经PCR扩增获得大约克猪SLA-1胞外区基因(命名为SLA-1-DYKe),将此片段克隆至pMD~汶19-T Simple Vector,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆菌并测序,将目的基因插入到原核表达载体pET-28a(+)中,转化至宿主菌BL21(DE3)进行诱导表达,用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,大量诱导提取包涵体并检测。结果显示,PCR成功扩增SLA-1-DYKe的胞外区,得到大小为837bp的目的基因,目的基因成功克隆至pMD~汶19-T Simple Vector,并获得序列正确的重组质粒。以得到的重组质粒成功构建了SLA-1-DYKe/pET-28a(+)表达载体,目的蛋白大小约为34ku。本研究成功构建了大约克猪SLA-1原核表达载体,获得了表达蛋白,为今后研究大约克猪SLA-1的空间结构和基因功能奠定了基础。
【作者单位】： 大连大学生命科学与技术学院;
【关键词】： 大约克猪 SLA-基因 原核表达载体
【基金】：国家自然科学基金项目:猪源病毒CTL多肽表位与SLA-Ⅰ结晶研究(31172304) 2015年辽宁省大学生创新创业训练计划项目:育-大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达研究(20150086) 2014年大连大学大学生创新创业训练计划项目重点项目:育-大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达研究(2014066)
【分类号】：S828;Q78
【正文快照】： 大约克猪是中国引进的主要国外品系猪,其性能表现为增重快、饲料报酬高、瘦肉率高等,主要饲养在中国北方地区[1]。目前,国内已经对该品系猪进行了杂交等生产性能的研究[2-3],然而,对于该品系猪基因资源方面的研究缺乏,尤其是涉及到与遗传相关的免疫应答基因。主要组织相容复合

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1 方美英,胡晓湘,李宁,吴常信;小梅山、中梅山及大约克猪的SLA-DQB基因外显子2 PCR-RFLP多态性分析[J];遗传学报;2002年08期

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1 彭静;金华猪和大约克猪泌乳期乳腺组织的microRNA和转录组测序分析[D];浙江大学;2015年

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本文编号：540775