基因Ⅶd亚型新城疫病毒感染La Sota疫苗免疫鸡引起的免疫器官损伤及其对疫苗免疫效果的影响

发布时间：2017-07-16 05:18

  本文关键词：基因Ⅶd亚型新城疫病毒感染La Sota疫苗免疫鸡引起的免疫器官损伤及其对疫苗免疫效果的影响

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【摘要】：基因Ⅶd亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)是亚洲和非洲很多国家和地区的优势流行株。传统疫苗(La Sota)虽然能降低死亡率和发病率,但免疫鸡群中仍有基因Ⅶd亚型NDV的感染,且病毒仍可对免疫器官造成病理损伤。目前为止,免疫鸡群感染Ⅶd亚型NDV后免疫器官产生损伤的生物学效应机制还不明确。本研究首先用基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株和早期基因Ⅸ型NDV F48E8两株强毒株进行免疫鸡体内感染试验,比较了病毒在鸡主要免疫器官中的复制能力及其引起的病理变化、T淋巴细胞亚群比例变化和细胞因子应答情况。其次,为了评价免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV后免疫器官损伤对免疫应答的影响,我们在基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株感染免疫鸡后,分别接种了AI灭活疫苗及IBD弱毒疫苗,并在疫苗接种后定期检测血清中特异性抗体水平,比较了试验组与对照组之间的抗体效价的差异。1、La Sota疫苗免疫鸡感染基因VIId亚型NDV产生免疫器官损伤的机制本研究用基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株和基因Ⅸ型NDV F48E8株分别感染La Sota疫苗免疫鸡,于感染后第3,5和7天采集肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊及十二指肠,比较了病毒在组织中引起的病理变化及病毒复制情况。我们发现两株病毒感染免疫鸡后对免疫器官的损伤存在显著差异。基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株感染对免疫器官的损伤表现为脾脏肿大和胸腺出血等病变,组织病理学结果显示脾脏及胸腺中淋巴细胞变性坏死,动脉周围淋巴鞘淋巴细胞减少,法氏囊有少量异嗜性粒细胞浸润；而F48E8感染后免疫器官没有明显的眼观病变。病毒载量测定结果显示,感染后第5天,JS5/05株在脾脏、胸腺及法氏囊中的复制水平高于F48E8株,其中两株病毒在脾脏和胸腺中的含量存在显著差异(P0.05)。流式细胞术检测T淋巴细胞亚群比例结果显示,JS5/05株感染后7天脾脏及胸腺中CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+比值显著低于F48E8组(P0.05),而CD8+T淋巴细胞水平显著高于F48E8组(P0.05)。细胞因子测定结果显示,在感染后第3,5及7天时,J85/05株诱导的IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IFN-β、IFN-γ和LITAF的表达水平均显著高于F48E8感染组(P0.05)。说明基因VIId亚型NDV在免疫器官中的高效复制,刺激产生过激的先天性免疫应答和炎症反应,结果共同造成了免疫器官中严重的病理损伤。2、基因VlId亚型NDV感染La Sota疫苗免疫鸡后对疫苗免疫效果的影响为了评价La Sota疫苗免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV后免疫器官损伤对免疫应答的影响,本研究以基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株攻击免疫鸡后5天,分别接种禽流感(Avian influenza, AI)灭活疫苗及传染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)弱毒疫苗作为试验组,同时分别设AI或IBD疫苗免疫组作为对照组。免疫后定期采血,测定试验鸡血清中的抗体水平,以血凝抑制试验(hemagglutination inhibition, HI)检测血清中AI的抗体滴度；以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中IBD的抗体滴度。结果显示,免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV JS5/05株后,灭活疫苗和弱毒疫苗产生的抗体水平均显著低于相应的免疫对照组。试验组AI抗体滴度在整个试验期明显低于免疫对照组,免疫后2周试验组与免疫对照组的结果分别为6.75+0.96log2和5.50+0.58 log2,差异显著(P0.05)。试验组IBD抗体滴度在免疫后1,2和3周时分别为459.03±1036.04、5133.13±1071.97、3868.62±960.95,而免疫对照组的结果分别为2015.91±1792.24、7547.81±1012.38、7137.09±1526.90,两组在免疫后1周存在显著差异(P0.05),在免疫后2及3周时差异极显著(P0.01)。以上结果显示,免疫鸡群感染基因VIId亚型NDV后,可引起免疫抑制效应,对后续疫苗免疫效果产生影响,且这种抑制作用对于弱毒疫苗更为明显。
【关键词】：基因Ⅶd亚型新城疫病毒 免疫鸡 侵嗜性 免疫应答
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 符号说明10-12
• 第一章 文献综述12-25
• 1 新城疫及新城疫病毒概述12-15
• 1.1 新城疫及新城疫病毒12
• 1.2 新城疫病毒的致病性12-13
• 1.3 新城疫病毒流行历史及我国流行现状13-14
• 1.4 基因Ⅶ型NDV对鸡的致病性研究进展14-15
• 2 家禽对新城疫病毒的免疫应答15-19
• 2.1 家禽对NDV的天然免疫应答15-16
• 2.2 家禽对NDV的体液免疫应答16-17
• 2.3 家禽对NDV的细胞免疫应答17-19
• 参考文献19-25
• 第二章 La Sota疫苗免疫鸡感染基因Ⅶd亚型NDV产生免疫器官损伤的机制25-46
• 1 材料26-27
• 1.1 疫苗与毒株26
• 1.2 鸡胚及试验动物26
• 1.3 主要试剂与仪器26-27
• 2 方法27-31
• 2.1 疫苗的制备27
• 2.2 试验鸡的免疫及分组27
• 2.3 攻毒株滴度测定27-28
• 2.4 免疫鸡攻毒28
• 2.5 脏器病毒载量测定及病理切片制备28-30
• 2.6 免疫器官T细胞亚群比例及细胞因子基因表达检测30-31
• 3 结果31-40
• 3.1 临床症状及大体病理变化31-32
• 3.2 组织病理学变化32-34
• 3.3 qRT-PCR技术检测脏器中病毒含量34-36
• 3.4 流式细胞术检测免疫器官T淋巴细胞亚群比例36-38
• 3.5 qRT-PCR技术检测免疫器官中相关细胞因子表达38-40
• 4 讨论40-43
• 参考文献43-46
• 第三章 基因Ⅶd亚型NDV感染La Sota疫苗免疫鸡后对疫苗免疫效果的影响46-57
• 1 材料47-48
• 1.1 病毒47
• 1.2 疫苗47
• 1.3 试验动物47
• 1.4 主要试剂47
• 1.5 主要仪器47-48
• 2 方法48-50
• 2.1 试验鸡的免疫及分组48-49
• 2.2 血清的制备49
• 2.3 HI试验检测血清中AI抗体49
• 2.4 ELISA检测血清中IBD抗体49
• 2.5 试验数据分析49-50
• 3 结果50-52
• 3.1 免疫鸡感染基因Ⅶd型NDV对IBD疫苗免疫效果的影响50-51
• 3.2 免疫鸡感染基因Ⅶd型NDV对AI疫苗免疫效果的影响51-52
• 4 讨论52-54
• 参考文献54-57
• 全文小结57-58
• 致谢58-59

【参考文献】

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本文编号：547251