猪源大肠杆菌、沙门菌裂解性噬菌体的分离鉴定与初步应用

发布时间：2017-07-20 05:10

  本文关键词：猪源大肠杆菌、沙门菌裂解性噬菌体的分离鉴定与初步应用

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【摘要】：大肠杆菌与沙门菌是养殖环境中广泛存在的革兰阴性病原菌,主要引起仔猪严重腹泻和败血症,给养殖业带来巨大的经济损失。近年来,随着抗生素滥用及养殖密度增加,大量耐药及多重耐药菌株不断涌现,使得大肠杆菌病和沙门菌病的防治变得越来越困难。噬菌体具有天然的杀菌能力,能特异性感染并杀死细菌,可作为一种新型的抗生素补充制剂,正被人们广泛关注。本研究利用药敏试验成功筛选出具有多重耐药性的临床分离大肠杆菌SY株与猪霍乱沙门菌CVCC3383株作为宿主菌,经双层琼脂法从健康猪新鲜粪便中分离到相应的裂解性噬菌体EP-SY和SP3383。并对EP-SY和SP3383进行生物学特性及抗感染初步应用研究。生物学特性检测结果显示,噬菌体EP-SY和SP3383对宿主具有较强的特异性,裂解谱较窄;两者的遗传物质都均为双链DNA分子;对氯仿和乙醚不敏感,无囊膜。EP-SY属肌尾病毒科,头部呈二十面体立体对称,直径80.00±5.71 nm,尾长85.71±9.89 nm,对温度和酸碱环境耐受能力强,可耐受40~65℃或pH值3~12的环境,最佳感染复数为0.01,潜伏期约10 min,爆发期约70 min,平均爆发量约为22.8 PFU/cell。噬菌体SP3383头部呈球形,直径41.40±0.33 nm,有一不可伸缩的长尾,尾长96.49±0.38 nm,属长尾病毒科,可耐受40~65℃或pH值4~11的环境,最佳感染复数为0.1,潜伏期约30 min,爆发期约60 min,平均爆发量约48 PFU/cell。噬菌体EP-SY和SP3383分别对耐药大肠杆菌和沙门菌具有很强的体外裂解活性,对小鼠无明显毒副作用。分别灌胃接种EP-SY、SP3383可使宿主菌感染小鼠脾脏和肠道组织内活菌数显著下降,肠道病变减轻。综上所述,本研究所分离到的噬菌体EP-SY和SP3383可分别裂解多重耐药大肠杆菌和沙门菌,对宿主菌感染小鼠具有一定的预防和治疗作用,为后续应用噬菌体奠定了基础。
【关键词】：耐药大肠杆菌 耐药沙门菌 噬菌体 生物学特性 初步应用
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-8
• 第一篇 文献综述8-15
• 1.1 猪大肠杆菌病与沙门菌病及其危害8-10
• 1.2 噬菌体的研究进展10-15
• 第二篇 研究内容15-49
• 第一章 猪源大肠杆菌与沙门菌噬菌体的分离鉴定15-29
• 1.1 材料15-17
• 1.2 方法17-21
• 1.3 结果21-26
• 1.4 讨论26-28
• 1.5 小结28-29
• 第二章 猪源大肠杆菌与沙门菌噬菌体的生物学特性检测29-38
• 2.1 材料29
• 2.2 方法29-31
• 2.3 结果31-35
• 2.4 讨论35-37
• 2.5 小结37-38
• 第三章 猪源大肠杆菌与沙门菌噬菌体的初步应用38-49
• 3.1 材料38-39
• 3.2 方法39-41
• 3.3 结果41-45
• 3.4 讨论45-48
• 3.5 小结48-49
• 结论49-50
• 参考文献50-57
• 作者简介57-58
• 致谢58

【共引文献】

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本文编号：566372