一种禽用微生态制剂的制备及其功能研究
发布时间：2017-07-31 08:09
本文关键词：一种禽用微生态制剂的制备及其功能研究
更多相关文章： 微生态制剂 生长性能 空肠弯曲杆菌 沙门氏菌 Real-time PCR
【摘要】：空肠弯曲杆菌和沙门氏菌是自然界广泛存在的人畜共患病原菌,主要引起动物和人的肠胃炎、腹泻等疾病。其中家禽是人和动物感染空肠弯曲杆菌和沙门氏菌的主要来源,由于抗生素的滥用和不合理应用,导致产生越来越多耐药的空肠弯曲杆菌和沙门氏菌,对畜禽生产、人类健康构成了严重的威胁。本研究拟筛选合适的材料包埋具有抗菌活性的乳酸菌制备微生态制剂,并对其防治空肠弯曲杆菌和沙门氏菌的效果进行研究。本研究通过筛选合适的材料包埋活性乳酸菌,采用冷冻干燥方法制备禽类微生态制剂,最佳保护剂确定为:可溶性淀粉100g/L、脱脂奶粉30g/L和玉米淀粉20g/L。得到的微生态制剂冻干后活菌数高达2.33×1010cfu/pb左右,具有胃酸耐受性强、肠溶释放性高、不易受潮的特点,在-20℃和4℃条件下能长期保存,常温下(25~30℃)能保存30天左右。为检测动物空肠弯曲杆菌和沙门氏菌的排放量,本研究建立了空肠弯曲杆菌和沙门氏菌Real-time PCR标准曲线,建立结果为:空肠弯曲杆菌重组质粒拷贝数(Copynumber)与循环阈值(Ct)之间的线性关系曲线表达式为:Ct=-3.52x+47.92,相关系数为R2=0.996。沙门氏菌重组质粒拷贝数(Copynumber)与循环阈值(Ct)之间的线性关系曲线表达式为:Ct=-3.43x+43.2,相关系数为:R2=0.994。以上两种标准曲线相似系数高,误差小。为研究微生态制剂对鸡免疫功能的影响,本研究在实验组基础日粮中添加1.0%微生态制剂,对照组不作处理,试验期间检测各组试验鸡的生长性能、肠道黏膜和免疫性能。结果表明:实验组平均体重比对照组提高了9%(P㩳0.05);25日龄,实验组法氏囊指数、胸腺指数较对照组分别提高了10.44%、36.56%(P㩳0.05),35日龄,实验组法氏囊指数和脾脏指数分别提高了40.12%和19.30%,差异显著(P㩳0.05),实验组的小肠肠壁与肠黏膜较厚,肠绒毛较长较粗,排列较整齐。以上结果表明微生态制剂对雏鸡具有增加体重,提高免疫力和促进肠道生长发育的作用。为研究微生态制剂防治肠道疾病的功能,本研究将动物分为防治组、对照组、攻毒组和治疗组。结果表明:11日龄攻毒空肠弯曲杆菌ZC8后,29日龄防治组的平均体重比对照组、攻毒组和治疗组分别高出30.83g、78.57g和14.39g,治疗组比攻毒组高64.18g;防治组的空肠弯曲杆菌的排放量呈下降趋势,攻毒组的排放量呈先下降后上升的趋势,治疗组在接受微生态制剂治疗后,排放量呈下降趋势。19日龄攻毒鼠伤寒沙门氏菌CMCC50115后,相对于对照组,防治组29日龄平均体重降低了9.0g(P0.05),而相对于攻毒组,则提高了176.2g(P0.01);防治组沙门氏菌排放量呈下降趋势,而攻毒组则相反,沙门氏菌排放量呈上升趋势,28日龄时排放量达到1.64×105cfu/g(P0.01),治疗组在接受微生态制剂治疗后,沙门氏菌排放量有所减少。以上试验结果说明制备的微生态制剂对禽类空肠弯曲杆菌病和鼠伤寒沙门氏菌病具有明显的防治作用,具有增加体重,调节肠道微生态平衡的功能。
【关键词】：微生态制剂 生长性能 空肠弯曲杆菌 沙门氏菌 Real-time PCR
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.5
【目录】：
- 摘要2-4
- Abstract4-11
- 前言11-26
- 1 微生态制剂的研究进展11-18
- 1.1 微生态制剂的定义与分类11-14
- 1.1.1 益生素11-12
- 1.1.2 益生元12-13
- 1.1.3 合生元13-14
- 1.2 微生态制剂的作用机制14-16
- 1.2.1 过氧化氢14
- 1.2.2 细菌素14-15
- 1.2.3 有机酸类15
- 1.2.4 营养物质和消化酶类15-16
- 1.2.5 益生菌16
- 1.3 动物微生态制剂在养殖业上的应用16-18
- 2 动物微生态制剂的制备方法18-22
- 2.1 常用的保护剂18-19
- 2.2 常用的制备方法19-22
- 2.2.1 冷冻干燥技术19-20
- 2.2.2 喷雾干燥技术20-22
- 3 动物肠道微生物菌群的检测方法22-25
- 3.1 传统的分离培养方法22
- 3.2 基于分子杂交技术的分子标记法22-24
- 3.2.1 荧光原位杂交法22-23
- 3.2.2 实时荧光定量PCR法23
- 3.2.3 基因芯片技术法23-24
- 3.3 基于DNA指纹图谱的分析方法24-25
- 4.本研究的目的和意义25-26
- 第一章 禽用微生态制剂的制备26-38
- 1 试验材料26-27
- 1.1 菌种26
- 1.2 培养基26
- 1.3 仪器与试剂26-27
- 2 试验方法27-30
- 2.1 技术路线27
- 2.2 基础保护剂的筛选27-28
- 2.3 最佳复合保护剂的筛选28-29
- 2.3.1 乳酸菌的复苏与培养28
- 2.3.2 复合保护剂菌粉的制备28-29
- 2.3.3 不同复合保护剂的胃酸耐受性试验29
- 2.3.4 不同复合保护剂的肠溶释放性试验29
- 2.3.5 不同复合保护剂的吸潮性试验29
- 2.4 微生态制剂的保存期检测29
- 2.5 统计分析29-30
- 3 结果与分析30-36
- 3.1 基础保护剂对乳酸菌冷冻干燥存活率的影响30-31
- 3.2 最佳复合保护剂的筛选结果31-35
- 3.2.1 基础保护剂和辅助保护剂的组合31
- 3.2.2 不同复合保护剂对乳酸菌冷冻干燥存活量的影响31-32
- 3.2.3 不同复合保护剂在模拟胃液中对乳酸菌的保护效果32-33
- 3.2.4 不同复合保护剂中乳酸菌在模拟肠液中释放性的比较结果33-34
- 3.2.5 不同复合保护剂的吸潮性34
- 3.2.6 最佳复合保护剂的确定34-35
- 3.3 微生态制剂的形态外观35
- 3.4 微生态制剂在不同温度下的保存期35-36
- 4 讨论36-38
- 第二章 禽类微生态制剂功能研究38-60
- 1 材料38-40
- 1.1 微生态制剂及菌种38
- 1.2 实验动物及饲料38
- 1.3 培养基及试剂38-39
- 1.4 仪器及设备39-40
- 2 方法40-45
- 2.1 微生态制剂对鸡免疫功能及生长性能的影响40-41
- 2.1.1 生长性能的测定40
- 2.1.2 免疫器官指数的检测40
- 2.1.3 肠道黏膜形态的检测40-41
- 2.2 空肠弯曲杆菌和沙门氏菌Real-time PCR标准曲线的建立41-43
- 2.2.1 定量PCR引物41
- 2.2.2 细菌的复苏及培养41
- 2.2.3 细菌DNA模板的制备41
- 2.2.4 细菌DNA的扩增及纯化41-42
- 2.2.5 阳性重组质粒的制备42
- 2.2.6 Real-time PCR标准曲线的建立42-43
- 2.3 微生态制剂对鸡空肠弯曲杆菌病和沙门氏菌病的防治效果43-44
- 2.3.1 空肠弯曲杆菌动物实验方案43
- 2.3.2 鼠伤寒沙门氏菌动物实验方案43-44
- 2.3.3 动物粪便微生物DNA的抽提44
- 2.3.4 动物排放量的检测44
- 2.4 统计分析44-45
- 3 结果与分析45-55
- 3.1 微生态制剂对鸡免疫功能及生长性能的影响45-48
- 3.1.1 微生态制剂对鸡体重的影响45
- 3.1.2 微生态制剂对鸡免疫器官的影响45-47
- 3.1.3 微生态制剂对鸡肠道生长发育的影响47-48
- 3.2 空肠弯曲杆菌和沙门氏菌Real-time PCR标准曲线建立48-51
- 3.2.1 Real-time PCR最佳反应体系及程序的确定48-49
- 3.2.2 Real-time PCR引物特异性49-50
- 3.2.3 标准曲线的建立和直线回归方程的确定50-51
- 3.3 微生态制剂对禽类空肠弯曲杆菌病和沙门氏菌病的防治效果51-55
- 3.3.1 微生态制剂对空肠弯曲杆菌试验组动物体重的影响51-52
- 3.3.2 微生态制剂对空肠弯曲杆菌排放量的影响52-53
- 3.3.3 空肠弯曲杆试验组各组动物临床状态观察结果53
- 3.3.4 微生态制剂对沙门氏菌试验组动物体重的影响53-54
- 3.3.5 微生态制剂对沙门氏菌排放量的影响54-55
- 3.3.6 沙门氏菌试验组各组动物临床状态观察结果55
- 4 讨论55-60
- 4.1 微生态制剂对鸡免疫功能及生长性能的影响55-57
- 4.2 空肠弯曲杆菌和沙门氏菌Real-time PCR检测57
- 4.3 微生态制剂防治禽类空肠弯曲杆菌病和沙门氏菌病57-60
- 全文总结60-61
- 致谢61-62
- 参考文献62-67
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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，本文编号：598151
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/598151.html
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