山东三个地方鸡种早期肌纤维生长发育规律及相关基因表达比较分析

发布时间：2017-08-02 12:33

  本文关键词：山东三个地方鸡种早期肌纤维生长发育规律及相关基因表达比较分析

  更多相关文章： 鸡 肉品质 肌纤维 基因表达

【摘要】：随着生活水平的提高,消费者对鸡肉的品质要求也逐渐提高。肌肉的基本单位是肌纤维,鸡的肌纤维生长发育及特性与鸡肉品质性状密切相关。遗传是影响肌纤维发育的主要因素之一。山东省拥有丰富的地方鸡品种资源,是我们进行优质鸡育种的良好素材,对不同鸡品种肌纤维特性及调控机制的研究,可为我们深入探讨山东省地方鸡种肉品质特性,进行鸡肉品质改良奠定基础。本研究选用1日龄体重相近的济宁百日鸡、汶上芦花鸡和鲁西斗鸡3个地方鸡种作为试验材料,每个品种36只,共108只。分别在1日龄、1周龄、2周龄、3周龄、4周龄、5周龄采集相同部位的胸肌和腿肌样品,采用石蜡切片对各时间点肌纤维形态特点进行观察,测定各品种胸腿肌的肌纤维直径、肌纤维密度、肌节长度、肌内膜厚度,肌束膜厚度等指标;分别提取不同时间点胸肌和腿肌总RNA,应用实时荧光定量PCR测定Myf6、MyoD1、Myf5和MSTN等基因在胸肌和腿肌中的表达量,分析同一时间不同品种间和同一品种内不同发育阶段各基因的表达量变化,探讨肌纤维早期发育的基因表达调控规律,为今后肉品质性状分子标记辅助选择提供科学依据。研究结果如下:1.肌纤维直径和肌纤维密度4周龄时,百日鸡和斗鸡胸肌肌纤维直径显著长于芦花鸡(P0.05),5周龄时,斗鸡显著长于百日鸡和芦花鸡(P0.05),从出壳到4周龄时,3个鸡品种差异不显著;1日龄,百日鸡腿肌肌纤维直径显著长于斗鸡,1周龄,百日鸡和芦花鸡腿肌肌纤维直径显著长于斗鸡(P0.05),4周龄斗鸡腿肌肌纤维直径显著长于芦花鸡(P0.05),5周龄斗鸡显著长于百日鸡和芦花鸡(P0.05).1日龄,百日鸡和芦花鸡胸肌肌纤维直径密度显著高于斗鸡(P0.05),1周龄,芦花鸡和斗鸡显著高于百日鸡(P0.05),3周龄和5周龄,百日鸡和芦花鸡显著高于斗鸡(P0.05);1日龄,斗鸡腿肌肌纤维密度显著高于百日鸡和芦花鸡(P0.05),1周龄和3周龄百日鸡显著高于斗鸡和芦花鸡(P0.05),2周龄和5周龄百日鸡和芦花鸡显著高于斗鸡(P0.05)。从出壳到5周龄斗鸡、百日鸡和芦花鸡胸肌肌纤维直径分别增加17.8μm、16.01μm、16.79μm;肌纤维密度分别降低8671根/mm2、7920.18根/mm2、7710.82根/mm2;腿肌肌纤维直径分别增加19.1μm、14.3μm、15.85μm,肌纤维密度分别降低8287.43根/mm2、8609.18根/mm2、8618.77根/mm2。2.肌内膜、肌束膜、肌节长度2周龄,百日鸡和芦花鸡胸肌肌内膜厚度显著高于斗鸡(P0.05),3周龄芦花鸡显著高于百日鸡(P0.05),4周龄和5周龄,芦花鸡和斗鸡显著高于百日鸡;3周龄和5周龄,芦花鸡和斗鸡腿肌肌内膜厚度显著高于百日鸡(P0.05),4周龄斗鸡芦花鸡百日鸡(P0.05);3周龄胸肌肌束膜厚度百日鸡显著高于斗鸡(P0.05),4周龄和5周龄百日鸡和芦花鸡显著高于斗鸡(P0.05);4周龄腿肌肌束膜厚度芦花鸡斗鸡百日鸡(P0.05),5周龄芦花鸡和斗鸡显著高于百日鸡(P0.05);1周龄斗鸡胸肌肌节长度显著高于百日鸡和芦花鸡,2周龄和3周龄腿肌肌节斗鸡芦花鸡百日鸡(P0.05);1周龄斗鸡腿肌肌节长度低于百日鸡芦花鸡,1周龄、2周龄和3周龄,斗鸡的高于芦花鸡和百日鸡(P0.05)。3.基因相对表达量:MSTN基因在芦花鸡胸肌中表达量2周龄高于其它周龄,差异极显著(P0.01),腿肌中的表达量无显著差异;MSTN基因在斗鸡胸腿肌中的表达量4周龄时显著高于其他周龄;MSTN基因在百日鸡胸肌中表达量在4周龄和5周龄显著高于其它周龄,腿肌4周龄显著高于其它周龄(P0.05)。Myf6基因在4周龄芦花鸡胸肌中表达量显著高于其它周龄(P0.05);腿肌Myf6是在2周龄的表达量显著高于其他周龄(P0.05),Myf6在斗鸡胸肌中5周龄时表达量最高,Myf6基因在3周龄百日鸡胸肌中表达量显著高于其它周龄(P0.05),腿肌Myf6是在5周龄的表达量显著高于其他周龄(P0.05)。芦花鸡胸肌中MyoD1的表达量在3周龄时表达量最高,腿肌中是在4周龄时;MyoD1在百日鸡胸肌1日龄时表达量较高,腿肌中是在2周龄时;在斗鸡胸腿肌中4、5周龄时表达量高于其他周龄。在0~4周龄时,Myf5基因在斗鸡中胸腿肌表达量均高于在芦花鸡和百日鸡,该基因在三个鸡种胸腿肌中的表达模式不同。综上所述,不同品种肌纤维发育规律存在差异,4周龄和5周龄鲁西斗鸡胸肌和腿肌肌纤维发育显著快于百日鸡和芦花鸡;MSTN、Myf6、MyoD1、Myf5在3个鸡种胸肌和腿肌发育中发挥不同的调控作用,Myf5在百日鸡肌纤维早期生长发育中发挥重要的调控作用。
【关键词】：鸡 肉品质 肌纤维 基因表达
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831
【目录】：

• 符号说明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-13
• 1. 前言13-23
• 1.1 鸡肉肉品质的重要性及相关研究进展13-15
• 1.1.1 鸡肉品质的影响因素13-15
• 1.1.2 山东主要地方鸡种15
• 1.2 肌肉组织学特性与肉品质的关系15-19
• 1.2.1 肉品质评价15
• 1.2.2 肌肉组织学特性对肉质指标的影响15-19
• 1.3 影响肉品质的其他因素19
• 1.4 肌肉生长相关的重要基因19-22
• 1.4.1 MSTN基因（肌肉生长抑制素）19-20
• 1.4.2 MRFs家族20-22
• 1.5 本研究的目的和意义22-23
• 2. 材料与方法23-35
• 2.1 试验材料23-25
• 2.1.1 实验仪器23
• 2.1.2 试验耗材23
• 2.1.3 试验试剂23-24
• 2.1.4 溶液剂配制方法24
• 2.1.5 试验动物24
• 2.1.6 动物实验24-25
• 2.1.7 样品采集25
• 2.2 试验方法25-34
• 2.2.1 石蜡切片与肌节涂片25-28
• 2.2.2 RNA的提取及质量检测28-29
• 2.2.3 反转录29-30
• 2.2.4 引物设计和合成30
• 2.2.5 引物的检测30-31
• 2.2.5.1 普通PCR 25uL体系配制31
• 2.2.6 实时荧光相对定量PCR体系及反应条件31-34
• 2.3 数据处理34-35
• 3 结果与分析35-51
• 3.1 肌纤维切片观察35-41
• 3.1.1 三个品种肌纤维直径比较35-36
• 3.1.2 三个品种骨骼肌肌纤维密度比较36-38
• 3.1.3 三个品种骨骼肌肌内膜比较38-39
• 3.1.4 三个品种骨骼肌肌束膜比较39-40
• 3.1.5 肌节涂片的观察40
• 3.1.6 三个品种骨骼肌肌节比较40-41
• 3.2 总RNA的质量检测结果41
• 3.3 引物的检测结果41-42
• 3.4 基因的mRNA表达分析42-51
• 3.4.1 Myf6基因的表达42-44
• 3.4.2 MyoD1基因的表达44-46
• 3.4.3 Myf5基因的表达46-48
• 3.4.4 MSTN基因的表达48-51
• 4 讨论51-55
• 4.1 遗传背景对早期骨骼肌生长发育的影响51-53
• 4.2 肌纤维发育的基因表达调控53-55
• 5.总体结论与研究展望55-57
• 5.1 结论55
• 5.2 课题创新与展望55-57
• 5.2.1 课题创新55
• 5.2.2 研究展望55-57
• 参考文献57-62
• 致谢62

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本文编号：609326