复方中药对肉鸡腹水综合征肺动脉血管平滑肌表型转化活性因子的作用

发布时间：2017-08-03 04:03

  本文关键词：复方中药对肉鸡腹水综合征肺动脉血管平滑肌表型转化活性因子的作用

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【摘要】：目的：肉鸡腹水综合征(Ascites syndrome,AS)是一种致死性营养代谢疾病,其病机复杂,病因繁多,致死率高。对于该病目前仍没有统一的发病机制学说,给世界范围内的规模化商业肉鸡的饲养带来巨大的经济损失。肺动脉高压已被证明是肉鸡腹水综合征的关键环节,血管病变是机体引发肺动脉高压的起始因素。探索从血管生理病理学的角度解释肺动脉高压乃至肉鸡腹水综合征的发病机理有着极其重要的意义。通过检测平滑肌表型转化相关因子Myocardin、SM22a和KLF-4基因和蛋白的含量,研究复方中药以及平滑肌表型转化在以肺动脉高压为主要环节的肉鸡腹水综合征中起到的作用。本课题通过多因素法成功建立肉鸡腹水综合征模型,将330羽8日龄试验肉鸡随机分为6组：空白组、AS模型组、复方中药高剂组(2mL/kg·d)、复方中药中剂组(1mL/kg·d)、\复方中药低剂组(0.5mL/kg·d)和L-Arg药物组(1% L-Arg)。于15、25、35、45日龄,每组随机抽取5羽,病理解剖并取心肺组织,检测腹水心脏指数(Ascites heart index, AHI),用三色染色法(Masson)观察肉鸡肺动脉形态学上的结构,采用荧光定量PCR技术检测不同日龄肉鸡肺动脉血管Myocardin SM22 a和KLF-4的含量;通过ELISA法检测各个日龄肉鸡肺动脉Myocardin、SM22 α和KLF-4蛋白含量。初步探讨肺动脉血管平滑肌表型转化活性因子在肉鸡腹水综合征病变中的作用以及复方中药对肉鸡腹水综合征的防治机理。结果如下：1.与空白组相比,15、25、35、45日龄模型组肺动脉血管弹内膜肿胀,肌纤维杂乱断裂,向内膜突起。与模型组相比,复方中药高剂量组,复方中药中剂量,复方中药低剂量组以及L-Arg组在不同的日龄存在不同程度的修复内皮以及平滑肌的功能。说明肉鸡腹水综合征中平滑肌病变,复方中药在抑制平滑肌病变过程有重要的作用。2.荧光定量PCR结果表明,与空白组相比,模型组15、35和45日龄肺动脉血管KLF-4基因显著升高(P0.05),15、25、35和45日龄肺动脉血管SM22α与Myocardin基因显著降低(P0.05)：与模型组相比,复方中药高剂量组15、35和45日龄肺动脉血管KLF-4基因显著降低(P0.05),15、25、35和45日龄肺动脉血管SM2α与Myocardin基因显著升高(P0.05)：复方中药中剂量组15和35日龄肺动脉血管KLF-4显著降低(P0.05),35和45日龄肺动脉血管Myocardin基因显著升高(P0.05)，15、25、35和45日龄肺动脉血管SM22α基因显著升高(P0.05);复方中药低剂量组35日龄肺动脉血管KLF-4显著降低(P0.05),25和35日龄肺动脉血管SM22a基因显著升高(P0.05)：L-Arg组15、35和45日龄肺动脉血管KLF-4基因显著降低(P0.05),15、35和45日龄肺动脉血管Myocardin基因显著升高(P0.05),15、25、35和45日龄肺动脉血管SM22α基因显著升高(P0.05)3.Elisa结果表明,与空白组相比,模型组15、25和35日龄肺动脉血管KLF-4蛋白显著升高(P0.05),15、25、35和45日龄肺动脉血管SM22α和Myocardin蛋白显著降低(P0.05)：与模型组相比,复方中药高剂量组25和35日龄肺动脉血管KLF-4蛋白显著降低(P0.05),15和25日龄动脉血管SM22a蛋白显著升高(P0.05),15、25和35日龄动脉血管Myocardin蛋白显著升高(P0.05);复方中药中剂量组15日龄肺动脉血管KLF-4蛋白显著降低(P0.05),15、25和35日龄肺动脉血管Myocardin显著升高(P0.05),15、25、35和45日龄肺动脉血管SM22α蛋白显著升高(P0.05)；复方中药低剂量组15和25日龄肺动脉血管Myocardin蛋白显著升高(P0.05),15、25和45日龄肺动脉血管SM22a蛋白显著升高(P0.05);L-Arg组15、25和35日龄肺动脉血管KLF-4蛋白显著降低(P0.05),15、25和35日龄肺动脉血管Myocardin和SM22a蛋白显著升高(P0.05)结论：1.血管平滑肌表型转化因子myocardin、KLF-4、sm22 a参与了肉鸡腹水综合征病理发生发展。2.复方中药可以通过抑制动脉血管平滑肌表型转化来有效防治肉鸡腹水综合征。3.L-Arg可以通过抑制动脉血管平滑肌表型转化来有效防治肉鸡腹水综合征。
【关键词】：复方中药 肉鸡腹水综合征 SM22α和KLF4 Myocardin
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要8-10
• 文献综述10-20
• 1 肉鸡腹水综合征10
• 2. 肺动脉高压10-15
• 2.1 肺动脉高压病理生理学11
• 2.2 肺动脉高压的分子靶点11-15
• 2.2.1 内皮素(ET)11-12
• 2.2.2 前列环素(PGI)12
• 2.2.3 氧化应激12-13
• 2.2.4 气体分子13-14
• 2.2.5 离子通道14
• 2.2.6 炎症机制14-15
• 3 血管平滑肌细胞表型及转化15-20
• 3.1 平滑肌细胞生理特点15-17
• 3.2 平滑肌细胞标记基因17
• 3.3 血管平滑肌表型转变的机制17-19
• 3.4 VSMC表型转变相关疾病19-20
• 前言20-21
• 试验部分21-52
• 1 材料与方法21-23
• 1.1 试验动物21
• 1.2 复方中药的制备21
• 1.3 主要试剂21
• 1.4 试剂配制21-22
• 1.5 生物试剂盒22
• 1.6 试验仪器22-23
• 2. 试验方法23-30
• 2.1 实验动物分组及造模23-24
• 2.2 样品采集24
• 2.3 腹水心脏指数测定24
• 2.4 切片制作24-26
• 2.4.1 取材与固定24
• 2.4.2 脱水与透明24-25
• 2.4.3 浸蜡与包埋25
• 2.4.4 切片与贴片25
• 2.4.5 脱蜡染色25-26
• 2.5. 普通PCR检测目的基因26-28
• 2.5.1 引物设计26
• 2.5.2 Trizol法抽提RNA26-27
• 2.5.3 合成cDN A27-28
• 2.6 荧光定量PCR检测目的基因28-29
• 2.7 Elisa测定目标蛋白含量29-30
• 2.7.1 样品的处理及保存29
• 2.7.2 组织蛋白提取29
• 2.7.3 试剂准备29
• 2.7.4 测定目的蛋白步骤29-30
• 2.8 数据统计与分析30
• 3 结果30-45
• 3.1 肉鸡腹水症状和AHI30-31
• 3.2 切片观察肺血管平滑肌弹性纤维31-36
• 3.2.1 15日龄各组肺动脉切片观察32-33
• 3.2.2 25日龄各组肺动脉切片观察33-34
• 3.2.3 35日龄各组肺动脉切片观察34-35
• 3.2.4 45日龄各组肺动脉切片观察35-36
• 3.3 总RNA提取及常规RT-PCR检测36-43
• 3.3.1 肺血管总RNA提取与检测36
• 3.3.2 普通PCR电泳验证目的基因特异性36-37
• 3.3.3 各个目的基因标准曲线的建立37-41
• 3.3.4 复方中药对AS肉鸡不同日龄各组Myocardin-mRNA表达量的影响41
• 3.3.5 复方中药对AS肉鸡不同日龄各组KLF-4 mRNA表达量的影响41-42
• 3.3.6 复方中药对AS肉鸡不同日龄各组SM22a mRNA的表达量的影响42-43
• 3.4 AS肉鸡不同日龄各组目标蛋白表达量43-45
• 3.4.1 蛋白浓度标准曲线43
• 3.4.2 复方中药对AS肉鸡不同日龄各组Myocardin蛋白表达量的影响43-44
• 3.4.3 复方中药对AS肉鸡不同日龄各组KLF-4的蛋白表达量的影响44-45
• 3.4.4 复方中药对AS肉鸡不同日龄各组SM22α的蛋白表达量的影响45
• 4. 分析与讨论45-51
• 4.1 平滑肌表型转化与肉鸡腹水综合征45-47
• 4.1.1 平滑肌表型转化相关活性因子46-47
• 4.2 Myocardin、KLF-4和SM22α在肉鸡腹水综合征中的表达47-48
• 4.3 复方中药防治肉鸡腹水综合征的机制分析48-51
• 4.3.1 主要几味复方中药概述48-49
• 4.3.2 复方中药活性成分防治肉鸡腹水综合征机理49-51
• 4.4 精氨酸防治肉鸡AS的机制分析51
• 5. 结论51-52
• 参考文献52-62
• Abstract62-66
• 致谢66

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本文编号：612515