BMP15通过FAT1调控猪卵丘细胞凋亡及其关键分子通路分析

发布时间：2017-08-04 00:15

  本文关键词：BMP15通过FAT1调控猪卵丘细胞凋亡及其关键分子通路分析

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【摘要】：猪卵丘细胞属于卵泡颗粒细胞的一种,是位于卵母细胞外的一层颗粒细胞,除具有保护和支撑卵母细胞的作用外,还可为卵母细胞供给营养并调节卵母细胞的生长发育。此外,颗粒细胞凋亡是一种主动的、自然选择性的细胞死亡过程,也是卵泡发生闭锁的潜在原因,故卵泡的闭锁可能起始于颗粒细胞的凋亡。FAT1属于跨膜蛋白超家族的一员,位于细胞膜上,在许多关键的生物学过程中发挥重要作用。尽管FAT1已经表现出可调节细胞与细胞之间的结合能力及其肌动蛋白动力学方面的功能,但目前,关于FAT1基因是否影响猪卵丘细胞凋亡的报道较少,对于其影响猪卵丘细胞凋亡的机制亦不清楚。项目组前期高通量测序结果表明,BMP15作为猪卵丘细胞凋亡的抑制者,可上调FAT1基因的表达水平,然而许多关于BMP15在哺乳动物卵巢内的表达位置或是其分泌部位的研究报道不尽相同。故本研究首先利用PCR技术,分别检测了BMP15在猪卵母细胞和猪卵丘细胞中的表达情况,结果显示:BMP15在猪卵母细胞中特异性表达,即BMP15由猪卵母细胞特异性分泌,而在猪卵丘细胞中不表达。随后,为了探究BMP15是否对FAT1基因有所调控作用,我们在体外培养的猪卵丘细胞中外源添加人重组BMP15后,利用流式细胞术(FCM)检测了猪卵丘细胞凋亡的情况;通过荧光定量PCR(RT-q PCR)技术检测了FAT1基因表达水平的变化。结果显示:外源添加人重组BMP15后,猪卵丘细胞的凋亡水平下降,且FAT1基因表达有所上升。为了解析FAT1基因对猪卵丘细胞凋亡的影响及其作用机制,我们采用了RNA干扰技术,抑制FAT1基因在卵丘细胞中的表达;并再次利用FCM检测了降低FAT1基因表达前后,猪卵丘细胞的凋亡情况;通过RT-q PCR技术、蛋白印迹、免疫荧光等实验技术检测了凋亡相关通路关键基因的表达变化。结果显示,敲减FAT1基因后,β-catenin表达量没有变化(p0.05);cleaved caspase-3表达量明显上升(p0.05);BCL2/BAX比值显著下降(p0.05)。综上所述,FAT1可通过调控BCL2/BAX分子通路和caspase-3分子通路影响猪卵丘细胞凋亡。研究结果将为明确FAT1基因在猪卵丘细胞凋亡中的作用、探索其对卵母细胞成熟、卵泡发育与闭锁及早期胚胎发育等分子机制提供理论基础。
【关键词】：猪卵丘细胞 细胞凋亡 FAT1 分子调控通路
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩写词表10-11
• 前言11-12
• 第一篇 文献综述12-26
• 第1章 FAT1基因的研究进展12-15
• 1 FAT1基因的发现12
• 2 FAT1的结构12-13
• 3 FAT1的生物学功能13-15
• 第2章 猪卵丘细胞与卵泡发育及闭锁的相关研究15-20
• 1 卵丘细胞凋亡概述15-16
• 2 卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用16
• 3 卵丘细胞、卵母细胞、颗粒细胞及卵泡膜细胞间的相互作用16-18
• 4 卵丘细胞凋亡与卵泡发育的关系18-19
• 5 卵丘细胞凋亡在卵泡闭锁中的作用19-20
• 第3章 细胞凋亡相关信号通路的研究进展20-26
• 1 细胞凋亡概述20-21
• 2 Caspase家族在细胞凋亡中的作用21-22
• 3 BCL-2 家族在细胞凋亡中的作用22-26
• 第二篇 研究内容26-49
• 第1章 BMP15在猪卵巢中的表达情况及其对FAT1基因的调控作用26-36
• 1 材料与方法26-31
• 2 结果31-34
• 3 讨论34-35
• 4 小结35-36
• 第2章 FAT1基因对猪卵丘细胞凋亡的影响36-41
• 1 材料与方法36-38
• 2 结果38-39
• 3 讨论39-40
• 4 小结40-41
• 第3章 FAT1基因调控猪卵丘细胞凋亡的分子通路41-49
• 1 材料与方法41-44
• 2 结果44-46
• 3 讨论46-48
• 4 小结48-49
• 结论49-50
• 参考文献50-63
• 导师简介63-64
• 作者简介64-65
• 致谢65

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本文编号：616948