云南省部分地区宿主动物巴贝虫感染状况的调查研究

发布时间：2017-08-12 14:36

  本文关键词：云南省部分地区宿主动物巴贝虫感染状况的调查研究

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【摘要】：【目的】以云南省为本次研究的空间范围,家畜动物(牛、羊、马、驴、犬)和小型兽类为研究对象,采用巢氏PCR进行巴贝虫18S rRNA基因扩增及序列分析,了解云南省不同地区家畜动物和小型兽类感染巴贝虫的状况,为制定防治措施提供依据。【方法】1.样本来源共采集家畜动物和小型兽类样本3277份。其中在12个县采集家畜动物血液1073份(牛血274份、羊血395份、犬血354,马血33份,驴血17份)。在18个县采集分属4目9科26属的小型兽类脾脏样本2204份(德钦县346份,维西县99份,香格里拉县91份,玉龙县224份,景谷县76份,宁洱县88份,腾冲市39份,永德县215份,勐海县175份,勐腊县81份,云县68份,石屏县128份,弥勒县110份,宜良县94份,蒙自市22份,福贡县134份,泸水县114份,贡山县100份)。2.基因组DNA提取操作步骤按照TIANGEN组织/血液基因组DNA提取试剂盒说明书进行。3.PCR扩增(1)对于家畜动物,采用巢氏PCR扩增巴贝虫属18S rRNA基因接近全长的片段。(2)对于小型兽类,采用巢氏PCR扩增巴贝虫属18S rRNA基因接近全长的片段,并且采用巢氏PCR扩增微小巴贝虫18S rRNA基因部分片段。4.琼脂糖凝胶电泳将PCR第二轮扩增产物置于1.2%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪观察结果。5.基因序列测定和系统进化树分析将电泳检测到目的条带的pcr扩增产物进行测序,测序结果登陆ncbiblast网站进行同源性比较,并运用mega6.06软件进行系统进化树分析。【结果】1.共检测1073份家畜动物血液样本,检出巴贝虫阳性50份,总阳性率4.66%。其中274份牛血中检出11份阳性(4.01%),4份为牛巴贝虫,7份为双芽巴贝虫。395份羊血中检出38份阳性(9.62%),37份为奥氏巴贝虫样寄生虫,1份为狍巴贝虫样寄生虫;354份犬血中检出1份阳性(0.28%),为韦氏巴贝虫。其余33份马和17份驴中未检出阳性。2.共从6个县的家畜血液中检出巴贝虫,分别是香格里拉、漾濞、剑川、兰坪、云龙、耿马和勐腊。3.家畜血液阳性扩增产物的系统发育分析结果显示,7份双芽巴贝虫中,4份和昆明株(ay603402)、广东株(jq723014)位于同一大分支,3份和湖北株(hq840960)、卢氏株(jx495402)位于同一大分支。在4份牛巴贝虫中,1份与南非株(l19077)、巴西株(fj426364)位于同一大分支,3份和巴西株(ef458213)、美国株(hq264111)位于同一大分支。37份奥氏巴贝虫样寄生虫均与奥氏巴贝虫加拿大株(kc460321)同源性最高。狍巴贝虫样寄生虫与狍巴贝虫德国株(km657248)同源性最高。犬血中的1份韦氏巴贝虫基因序列与韦氏巴贝虫台湾株(hq148664)的同源性为99.7%。4.本调查共从2204份小型兽类脾脏中检出巴贝虫53份,感染率为2.40%,分属2目4科9属12种小兽,按照阳性率从高到低依次为是中华新猬(40.00%)、滇绒鼠(14.29%)、斯氏家鼠(7.53%)、中华姬鼠(5.91%)、中麝，

本文编号：662112