奇异变形杆菌与A亚群禽白血病病毒在SPF鸡中共感染的研究

发布时间：2017-08-14 01:16

  本文关键词：奇异变形杆菌与A亚群禽白血病病毒在SPF鸡中共感染的研究

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【摘要】：与禽白血病混合感染的病原较多,使得鸡群疾病防控和净化更复杂困难,引起了人们对该病的重视。本试验对鸡胚卵黄中分离到的奇异变形杆菌进行分离鉴定,同时对奇异变形杆菌和ALV-A在SPF鸡中共感染进行研究。1.本研究从死亡鸡胚的卵黄中分离到的疑似奇异变形杆菌的菌株,通过细菌培养、革兰氏染色镜检以及生化特性测定以及16S r RNA基因比对对分离菌进行鉴定。结果显示,分离菌的培养特性、革兰氏染色镜检以及生化特性符合奇异变形杆菌的特性,初步鉴定为奇异变形杆菌;应用PCR方法扩增出1465 bp的16S rRNA基因片段。经BLAST对比分析表明,与其同源性最高的均为奇异变形杆菌各株系的16S rRNA序列,同源性高达99%以上。检测结果表明,该分离菌为鸡奇异变形杆菌。2.将分离并鉴定的鸡奇异变形杆菌,经传代培养、灭活、调整抗原浓度、无菌检测以及染色等方法,制备该菌的凝集抗原,并利用该抗原与弗氏佐剂(Freund's Adjuvant)混合免疫兔子制备该菌的标准阳性血清。结果显示,用甲醛灭活细菌制备的抗原比加热灭活的灵敏度要高,且抗原最佳灭活条件为0.5%的甲醛溶液(24 h);凝集抗原的最适浓度为8.05×109 CFU/mL;最佳的染色液为草酸铵结晶紫染色液。制备的该菌的阳性血清经试管凝集试验测得效价可达1:512。3.建立SPF雏鸡感染奇异变形杆菌和ALV-A的免疫抑制模型。将120只14日龄SPF鸡随机分4组,各组隔离饲养,分别为ALV-A组、PM组、PM+ALV-A组,空白对照组。每组鸡于第1、2、3、4、5、6周随机取3只,检测相关指标。结果显示,感染后第2-3周,各感染组均有部分鸡出现临床症状,共感染组死亡率(26.7%)要高于ALV-A组(20%)、PM组(16.7%)。各感染组胸腺、脾脏、法氏囊等免疫器官指数不同程度的低于对照组,并且共感染组加重对免疫器官的损伤程度。感染鸡在6周龄,肉眼观察内脏器官无明显的肿大或肿瘤结节,病理组织学观察到在肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊等器官内呈现淋巴细胞样瘤细胞和出血现象。外周血T淋巴细胞数检测、鸡白细胞介素(IL-2)和干扰素(IFN-γ)检测结果显示,单感染和共感染组的CD~(4+)、CD~(8+)T细胞数、白细胞介素(IL-2)和干扰素(IFN-γ)的分泌量均低于对照组,并且共感染时免疫抑制程度最明显。鸡体内P27抗原和ALV-A抗体水平波动很大,呈现一定的负相关。该菌是奇异变形杆菌,研制的凝集抗原可用于鸡奇异变形杆菌感染或免疫后抗体的检测。奇异变形杆菌与ALV-A具有协同致病作用,共感染对SPF鸡的危害要比单感染严重。
【关键词】：奇异变形杆菌 分离鉴定 A亚群禽白血病病毒 共感染
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 符号及缩略词说明4-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 1 前言13-25
• 1.1 奇异变形杆菌综述13-20
• 1.1.1 病原学13-16
• 1.1.2 流行病学16-17
• 1.1.3 临床症状和病理变化17
• 1.1.4 检测方法17-19
• 1.1.5 防治19-20
• 1.2 禽白血病病毒（ALV）的研究进展20-24
• 1.2.1 ALV的基本结构20-21
• 1.2.2 ALV的理化特性21
• 1.2.3 ALV的核酸和基因组结构21-22
• 1.2.4 ALV临床症状及病理变化22-23
• 1.2.5 禽白血病的检测和诊断23-24
• 1.2.6 防治24
• 1.3 试验的目的和意义24-25
• 2 材料与方法25-36
• 2.1 病毒、菌株、细胞25
• 2.2 试验动物25
• 2.3 实验试剂及仪器设备25-26
• 2.4 细菌的分离鉴定及 16S r RNA序列测定26-30
• 2.4.1 细菌的分离以及生化鉴定26-27
• 2.4.2 药敏试验27
• 2.4.3 分离菌 16S rRNA的扩增27-30
• 2.5 奇异变形杆菌凝集抗原的制备30-32
• 2.5.1 细菌的培养30
• 2.5.2 细菌灭活30
• 2.5.3 细菌灭活效果的检测30
• 2.5.4 不同灭活方法处理的抗原反应原性检测30-31
• 2.5.5 抗原最佳工作浓度的确定31
• 2.5.6 不同染色液染色效果的检测31
• 2.5.7 凝集抗原的特异性检测31
• 2.5.8 血清的制备31-32
• 2.6 奇异变形杆菌与ALV-A共感染致病性研究32-35
• 2.6.1 病毒扩增及定量32
• 2.6.2 鸡奇异变形杆菌半数致死量测定32-33
• 2.6.3 实验分组及采样33
• 2.6.4 鸡群生长性能的变化33
• 2.6.5 对免疫器官指数的测定33
• 2.6.6 临床症状及组织病理学观察33-34
• 2.6.7 血清中细胞介素 2（IL-2）、γ-干扰素（INF-γ）的检测34
• 2.6.8 外周血CD~(4+)、CD~(8+) T淋巴细胞的检测34-35
• 2.6.9 P27抗原及ALV-A抗体的检测35
• 2.6.10 奇异变形杆菌抗体的检测35
• 2.7 数据分析35-36
• 3 结果与分析36-49
• 3.1 细菌的分离鉴定及 16S rRNA序列测定36-38
• 3.1.1 细菌的分离以及生化鉴定结果36-38
• 3.1.2 PCR扩增及测序结果38
• 3.1.3 药敏试验结果38
• 3.2 奇异变形杆菌凝集抗原制备的结果38-40
• 3.2.1 细菌灭活检测结果38-39
• 3.2.2 不同灭活方法制备的抗原反应原性的检测结果39
• 3.2.3 最佳抗原浓度的确定结果39
• 3.2.4 不同染色液染色后抗原敏感性的检测结果39-40
• 3.2.5 抗原的特异性检测结果40
• 3.2.6 奇异变形杆菌阳性血清效价测定结果40
• 3.3 奇异变形杆菌与ALV-A在SPF鸡中共感染的研究40-49
• 3.3.1 病毒定量以及鸡奇异变形杆菌半数致死量测定结果40-41
• 3.3.2 对SPF鸡生长性能的影响41
• 3.3.3 对免疫器官指数的影响41-43
• 3.3.4 临床症状及组织病理学变化43-45
• 3.3.5 血清中IL-2、INF-γ浓度检测结果45-46
• 3.3.6 外周血CD~(4+)、CD~(8+) T淋巴细胞检测结果46-47
• 3.3.7 P27抗原及ALV-A抗体的检测结果47-48
• 3.3.8 奇异变形杆菌抗体检测结果48-49
• 4 讨论49-53
• 4.1 细菌的分离鉴定49
• 4.2 奇异变形杆菌凝集抗原的制备49-50
• 4.3 PM与ALV-A共感染对SPF鸡的影响50-53
• 5 结论53-54
• 6 创新点54-55
• 参考文献55-67
• 致谢67-68
• 硕士期间发表的论文68-69
• 附录69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：669993