猪重要病毒检测方法的建立及其在2015年陕西省猪群中的感染及抗体检测

发布时间：2017-08-21 16:34

  本文关键词：猪重要病毒检测方法的建立及其在2015年陕西省猪群中的感染及抗体检测

  更多相关文章： 病原检测 核酸检测 免疫过氧化物酶单层细胞 抗体检测 风险分析

【摘要】：猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、伪狂犬病(PR)、猪圆环病毒病(PCVD)是对当前严重危害我国养猪业的重要病毒性传染病。病原的检测是疾病诊断的最直接依据,常用方法有病毒分离与鉴定、分子生物学检测和血清学检测(免疫过氧化物酶单层细胞试验、间接免疫荧光试验、中和试验和ELISA)等。抗体水平是评价动物免疫状态最常用的指标,是制定免疫程序的重要依据。本研究建立了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR,伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的多重PCR检测方法,为这些病毒的快速检测提供了有用方法;建立了检测CSFV和PCV2的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的方法,为在体外培养细胞上定量检测非致细胞病变(nCPE)病毒提供了参考方法。分别对2015年在陕西省22个地区的规模化猪场、屠宰场、散养户采集的696份猪血清进行了CSFV、PRRSV、PRV和PCV2及其抗体水平检测。获得了以下结果:1.建立了检测5种猪源病毒的双重RT-PCR及多重PCR方法(1)建立了CSFV和PRRSV检测方法。PCR最佳条件为,退火温度60℃,引物终浓度均为0.4μmol/L;CSFV扩增片段大小为438 bp、PRRSV为535 bp;CSFV的核酸检测量为7.5 pg/μL,PRRSV的为14.2 pg/μL。(2)建立了PCV2、PRV和PPV的三重PCR检测方法。PCR最佳条件为,退火温度56℃,PCV2和PRV的引物终浓度为0.2μmol/L,PRV为0.3μmol/L;PCV2扩增片段大小为880 bp、PRV为213 bp、PPV为295 bp;对PCV2 DNA的最低检测量为6.9 pg/μL,PRV为9.2 pg/μL,PPV为8.6 pg/μL。2.分别建立了检测CSFV、PCV2的IPMA检测方法。CSFV、PCV2一抗(猪瘟阳性血清、兔抗PCV2阳性血清)稀释浓度均为1:300,HRP-SPA浓度均为1:2000时有良好的敏感性和特异性。3.对2015年陕西省22个地区的696份猪血清样品的检测表明,CSFV抗体阳性率为81%、PRRSV为70%、PCV2为83%、PRV-gI为21%,PRV-gB为38%。CSFV核酸阳性率9%,PRRSV核酸阳性率14%,PCV2核酸阳性率23%,PRV核酸阳性率为20%。2015年,陕西省猪群中存在这四种病毒的感染,CSFV、PRRSV和PRV-gB抗体有待提高;在个别猪场这四种病毒的感染率较高,存在发生疫病的风险,应引起足够的重视,及时采取防控措施。
【关键词】：病原检测 核酸检测 免疫过氧化物酶单层细胞 抗体检测 风险分析
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 文献综述12-53
• 第一章 猪主要病毒性传染病及其防控12-23
• 1.1 猪瘟及其防控进展12-15
• 1.1.1 病原13
• 1.1.2 流行病学13
• 1.1.3 临床症状及病理变化13-14
• 1.1.4 猪瘟的诊断14-15
• 1.1.5 猪瘟的防控15
• 1.2 猪繁殖与呼吸综合征的防控进展15-17
• 1.2.1 病原15-16
• 1.2.2 流行病学16
• 1.2.3 临床症状及病理变化16
• 1.2.4 诊断方法16-17
• 1.2.5 防制17
• 1.3 伪狂犬病的防控进展17-19
• 1.3.1 病原17-18
• 1.3.2 流行病学18
• 1.3.3 临床症状及病理变化18
• 1.3.4 诊断18-19
• 1.3.5 防控19
• 1.4 猪圆环病毒病的防控进展19-21
• 1.4.1 病原19-20
• 1.4.2 流行病学20
• 1.4.3 临床症状及病理变化20-21
• 1.4.4 诊断21
• 1.4.5 防控21
• 1.5 本研究的目的及意义21-23
• 第二章 CSFV、PRRSV、PRV、PPV和PCV2多重RT-PCR和PCR检测方法的建立23-37
• 2.1 材料与方法23-28
• 2.1.1 材料23-24
• 2.1.2 方法24-28
• 2.2 结果28-35
• 2.2.1 CSFV和PRRSV双重PCR检测方法的建立28-32
• 2.2.2 PCV2、PRV和PPV三重PCR检测方法的建立32-35
• 2.3 讨论35-36
• 2.4 小结36-37
• 第三章 检测CSFV、PCV2免疫过氧化物酶单层细胞实验方法的建立37-43
• 3.1 材料与方法37-40
• 3.1.1 材料37-38
• 3.1.2 方法38-40
• 3.2 结果40-41
• 3.2.1 检测CSFV的IPMA方法的建立40
• 3.2.2 检测PCV2的IPMA方法的建立40-41
• 3.3 讨论41-42
• 3.4 小结42-43
• 第四章 2015年陕西省猪群中CSF、PRRS、PR和PCVD病原和抗体检测43-53
• 4.1 材料与方法43-46
• 4.1.1 材料43-44
• 4.1.2 方法44-46
• 4.2 结果46-51
• 4.2.1 2015年陕西省猪群四种病毒病抗体检测46-49
• 4.2.2 四种重要病毒病在2015年陕西省不同县（区）猪群的感染情况49-51
• 4.2.3 四种重要病毒病在2015年陕西省不同猪群的免疫抗体推算情况51
• 4.3 讨论51-52
• 4.4 小结52-53
• 结论53-54
• 参考文献54-58
• 缩略词58-59
• 致谢59-60
• 作者简介60

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